SN_T 3644-2013出口燕窝及其制品中唾液酸的测定方法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 3644—2013出口燕窝及其制品中睡液酸的测定方法Determination of Sialic acid in cubilose and its products for export2013-08-30 发布2014-03-01实施中华人民共和国发布K国家质量监督检验检疫总局 SN/T 3644—2013言前 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国广东出人境检验检疫局。本标准主要起草人：黄华军、李敏、奚星林、林峰、陈文锐、席静、陈秀明、李双、潘丙珍、庞世琦。I SN/T 3644—2013出口燕窝及其制品中睡液酸的测定方法1范围本标准规定了出口燕窝及其制品中唾液酸检测的分光光度法和液相色谱-质谱/质谱确证方法。本标准适用于出口燕窝及其制品中唾液酸含量的测定和确证。2方法提要将燕窝中的糖蛋白用醋酸水解，释放出的睡液酸与酸性节三酮形成稳定的黄色化合物，用分光光度法定量测定，以液相色谱-质谱/质谱确证。3安全提示本方法中的一些试验过程可能导致危险情况，便用的部分试剂真有腐蚀性或刺激性，还有高温加热过程，操作时须小心谨慎！操作者应采取适当的安全和健康措施，必要时佩戴橡胶手套或棉纱手套。4试剂和材料除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为实验室三级水。4.1日甲醇，HPLC级。4.2冰醋酸。4.350%醋酸溶液：分别量取56mL冰醋酸和50mL.水，混匀备用。4.4盐酸。4.5硫酸铵。4.6三酮。4.7节三酮指示剂：往2.5g节三酮中加人60mL冰醋酸和40mL盐酸，搅拌溶解。4.8透析袋：截留分子量14000。4.9睡唾液酸标准物质（N-Acetylneuraminicacid，CAS号131-48-6）：纯度≥99%，在-18℃保存。4.10唾液酸标准溶液（200μL/mL）：准确称取适量唾液酸标准物质，用水配成浓度为200μg/mL的唾液酸标准溶液。该溶液即配即用。4.11沸石。5仪器和设备5.1可见分光光度计。5.2液相色谱-质谱/质谱联用仪：配有电喷雾离子源。5.3烘箱，102℃～105℃。5.4研钵。5.5筛网：100目筛。 SN/T3644-20135.6电子天平：感量为0.01mg和0.001g。5.7磨砂口三角瓶：250mL。5.8加热设备：平板电炉。5.9冷凝回流装置。离心管：50mL，聚丙烯材质（PP)。5.10离心机：3000r/min，12000r/min。5.115.12比色管：10mL，玻璃材质。比色皿：1cm，石英材质。5.135.14容量瓶：100mL，玻璃材质。5.15移液枪：2mL，10mL。6样品制备6.1[固体燕窝的制备取燕窝样品在105℃烘箱中烘干，在干燥器中冷却后研磨，过100目筛后装入洁净容器，密闭备用。6.2燕窝制品的制备液体状态的燕窝制品，用打浆机制样，静置等待泡沫与样液分层后，茫去泡沫（或用离心机离心分层），取适量下清液装人透析袋（4.8）中，在流动水中透析24h，透析后的样液装人洁净容器，密闭备用。7测定步骤7.1睡液酸提取7.1.1固体燕窝的唾液酸提取称取0.1g（精确到0.001g）样品粉末（6.1)到磨砂口三角瓶中，加人50%醋酸溶液（4.3)20.0ml加沸石几颗。置于加热板上，安装好冷凝回流管，加热至沸，计时10min。取下三角瓶，可用流动水快速冷却瓶壁，水解液降至室温后，经漏斗转移到100mL容量瓶，用适量水洗涤三角瓶两次，最后用蒸馏水定容。摇匀后倒出10.0mL到加有1.2g硫酸铵的离心管中，用玻棒搅匀，使硫酸铵溶解，拧紧盖子，放人离心机，3000r/min离心10min。上清液备用。7.1.2液态燕窝制品的睡液酸提取称取10g（精确到0.001g)样液（6.2)到磨砂口三角瓶中，加人冰醋酸10.0mL，加沸石几颗，置于加热板上，安装好冷凝回流管，加热至沸，计时10min。取下三角瓶，可用流动水快速冷却瓶壁，水解液降至室温后，经漏斗转移到100mI容量瓶，用适量水洗涤三角瓶两次，最后用蒸馏水定容。摇匀后倒出10.0mL到加有1.2g硫酸铵的离心管中，用玻棒搅匀，使硫酸铵溶解，拧紧盖子，放人离心机，3000r/min离心10min，上清液备用。如果燕窝制品很浓稠，在加热水解时容易焦糊，则称样5g（精确到0.001g），加入50%酷酸溶液15.0mL，后续步骤如上。7.2睡液酸含量的测定7.2.1分光光度法测定取上清液（7.1)2.0mL于10mL比色管中，再加人节三酮指示剂（4.7)2.0mL与冰醋酸2.0mL，2 SN/T 3644—2013摇匀，在100℃水浴中显色10min，取出试管在流动水中迅速冷却，然后倒入1cm比色Ⅲ，