SN_T 4848.7-2017出口蜂蜜中常见蜜源植物成分的检测方法 实时荧光PCR法 第7部分：荔枝和龙眼.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 4848.7--2017出口蜂蜜中常见蜜源植物成分的检测方法实时荧光PCR法第7部分：荔枝和龙眼Identification of common honey plant species in export honey-Real-time PCR method-Part 7 : Litchi and longan2017-07-21发布2018-03-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局1刮涂层查真伪！ SN/T 4848.7—2017前言SN/T4848《出口蜂蜜中常见蜜源植物成分的检测方法实时荧光PCR法》共分为8部分：-第1部分：荆条；一第2部分：油菜；-第3部分:洋槐;-第4部分：桉树；-第5部分：树；第 6部分：龙眼;第7部分：荔枝和龙眼；一第8部分：紫云英。本部分为SN/T4848的第7部分。本部分按照GB/T1.1-2009给出的规则起草请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国上海出人境检验检疫局、中华人民共和国安徽出人境检验检疫局。本部分主要起草人：陈颖、吴亚君、杨艳歌、刘鸣畅、李想、王斌、韩建勋、邓婷婷、张九凯、宗凯。* SN/T 4848.7—2017出口蜂蜜中常见蜜源植物成分的检测方法实时荧光 PCR 法第7部分：荔枝和龙眼1范围SN/T4848的本部分规定了出口蜂蜜中荔枝、龙眼成分的实时荧光PCR检测方法。本部分适用于出口蜂蜜中荔枝、龙眼成分的定生检测本部分所规定方法的最低检出限(LOD)为0.1%（质量百分比）。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的，凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其必威体育精装版版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法GB14963--2011　食品安全国家标准　蜂蜜GB/T 27403—2018　实验室质量控制规范　食品分子生1. 3术语和定义下列术语和定义适用于本文件3.1蜂蜜honeyn蜜蜂采集植物的花蜜、分泌物或蜜露，与自身分泌物混合后，经充分造而成的天然甜物质。3.2荔枝litchi荔枝（Litchi chinensis Sonn.），文名离枝丹荔，无患子科、荔枝属植物。3.3龙眼‧longan龙眼（Dimocarpus longan Lour.），又名圆眼、桂圆、羊眼果树，无患子科、龙眼属植物。3.4实时荧光 PCR real time PCR在 PCR反应体系中加人荧光基团，利用荧光信号的积累实时监控整个PCR扩增过程，实现对起始模板的定量及定性分析。3.5Ct 值 cycle threshold每个反应管内的荧光信号到达设定的域值时所经历的循环数。4缩略语下列缩略语适用于本文件。1 SN/T 4848.7—2017DNA:脱氧核糖核酸(deoxyribonuleic acid)PCR:聚合酶链式反应(polymerase chain reaction)dNTP:脱氧核苷酸三磷酸(deoxyribonuleoside triphosphate)dATP:脱氧腺苷三磷酸(deoxyadenosine triphosphate)dCTP:脱氧胞苷三磷酸（deoxycytidine triphosphate)dGTP:脱氧鸟苷三磷酸(deoxyguanosine triphosphate)dTTP：脱氧胸苷三磷酸（deoxythymidine triphosphate）UNG:尿嘧啶 N-糖基化酶(uracil N-glycosylase)CTAB：十六烷基三甲基溴化铵(cetyltrithylammonium bromide)Tris:三羟甲基氨基甲烷［Tris(Hydroxymethyl)aminomethane]EDTA:乙二胺四乙酸(Ethylene diaminetetraacetic acid)Taq:水生栖热菌(Thermus aquaticus)OD:光度密度(optical density）)FAM:羧基荧光素(Carboxyfluorescein)TAMRA;羧基四甲基罗丹明(Carboxy-tetramethyl-rhoda mine)BHQ1:黑洞猝灭基团 1(Black hole quencher 1)方法提要5提取样品DNA，以荔枝或龙眼源性DNA为阳性对照，以其他蜜源植物 DNA为阴性对照，无菌水作为空白对照，使用特异性引物和探针进行实时荧光PCR扩增，观察实时荧光PCR的增幅现象判定是否存在荔枝或龙眼成分。6试剂和材料除另有规定外，所有试剂均为分析纯或生化