SC_T 7016.5-2012鱼类细胞系 第5部分：鲤上皮瘤细胞系(EPC).pdf

ICS 65.150B 50SC中华人民共和国水产行业标准SC/T 7016.52012鱼类细胞系第5部分：鲤上皮瘤细胞系（EPC）Fish cell lines--Part 5 : Epithelioma papulosum cyprini cell line (EPC)2012-12-07 发布2013-03~01实施中华人民共和国农业部发布 SC/T 7016. 5—2012前言SC/T7016《鱼类细胞系》分为下列部分：-第1部分：胖头够肌肉细胞系(FHM);-第2部分：草鱼肾细胞系(CIK)；一第3部分：草鱼卵巢细胞系(CO);-第 4部分:虹鳟性腺细胞系(RTG-2);一第5部分：鲤上皮瘤细胞系(EPC)；一第6部分：大鳞大麻哈鱼胚胎细胞系(CHSE);一第7部分：棕细胞系(BB)；;一第8部分:斑点叉尾卵巢细胞系(CCO);第9部分：蓝鳃太阳鱼细胞系(BF-2);第10部分：狗鱼性腺细胞系(PG);第11部分：虹鳟肝细胞系(R1)；一第12部分:鲤白血球细胞系(CIC);本部分为SC/T7016的第5部分。本部分按照GB/T1.1给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本部分由农业部渔业局提出。本部分由全国水产标准化技术委员会（SAC/TC156)归口。本部分起草单位：全国水产技术推广总站、深圳出人境检验检疫局。本部分主要起草人：陈爱平、王姝、兰文升、张利峰、高隆英、沈锦玉、李乐。Tl SC/T 7016. 5—2012鱼类细胞系第5部分:鲤上皮瘤细胞系(EPC)1 范围本标准描述了鲤上皮瘤细胞系(Epithelioma papulosum cyprini cell line,EPC)的形态、传代培养条件、生长特性、针对部分水生动物病的敏感谱及传代细胞的质量控制。本标准适用于鲤上皮瘤细胞系的培养、使用和保藏。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义3. 1鲤上皮瘤细胞系 epithelioma papulosum cyprini cell line,EPCFijan N．等人 1983年从鲤(Cyprinus carpio)的上皮瘤细胞经原代培养、衍生的连续细胞系。4 细胞的形态、大小与特性4. 1 形态为上皮样细胞（参见图A.1）。4.2大小经细胞实时分析系统测定细胞悬浮后的平均直径约11.19μm，其中最大量细胞的峰值直径约9.55μm(参见 B. 2)。4.3特性4.3.1生长特性贴壁生长。4.3.2对部分水生动物病原的敏感性EPC对鲤春病毒血症病毒（Spring viraemia of carp virus,SVCV)、传染性造血器官坏死病毒（In-fectious haematopoietic necrosis virus,IHNV)、流行性造血器官坏死病毒（Epizootic haematopoieticnecrosis virus,EHNV)、病毒性出血性败血症病毒(Viral haemorrhagic septicaemia virus,VHSV)等病毒敏感，接种后的 CPE形态参见附录 A。5主要材料与仪器设备5.1 水应符合GB/T 6682中一级水的规定。5.2细胞培养液主要成分见附录C.1。 SC/T 7016. 5-—20125.3细胞消化液主要成分及其含量见C.2。5.4血清胎牛血清。5.5仪器设备主要包括：-生化培养箱、超净工作台、真空泵和废液瓶等培养细胞所用的设备；一倒置显微镜;一血球计数板或电子细胞计数仪；一细胞培养瓶、移液器或洗耳球以及移液管等培养细胞所用的耗材。6细胞培养条件6.1培养温度细胞置于生化培养箱内，在15℃～27℃下培养,最适生长温度为25℃。6.2 培养液 pH7.2~7.6。７ 细胞传代与保藏7.1传代程序7.1.1吸弃旧培养液置于超净工作台内，无菌环境下吸弃长满单层EPC细胞培养瓶中的旧培养液，7.1.2消化细胞用细胞消化液消化分散细胞。沿细胞培养瓶一侧加人细胞消化液，一般在50ml细胞培养瓶中加人5mL左右或按细胞培养瓶培养面每平方厘米加入0.1ml～0.2mL，加人量必须完全漫没细胞层贴壁长满的EPC消化时间一般为1min～3min，细胞开始呈雾状之后吸弃细胞消化液，轻轻拍打培养瓶以分散细胞。7.1.3更换细胞培养液与分瓶将消化液吸弃后，在50ml细胞培养瓶中加人10ml.～15ml.细胞培养液(C.1）,按每瓶5ml分成2瓶～3瓶，使细胞终浓度达到1×105个/mL。分瓶后在25℃下培养,8h内细胞贴壁并生长；18