DB37_T 3560-2019荷斯坦牛致死单倍型（HH1、HH3、HH4和HH5）基因检测技术规程.pdf

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2023-08-01 发布于山东
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ICS65. 020. 01B 40DB37山東东省地方标准DB 37/T 3560—2019荷斯坦牛致死单倍型（HH1、HH3、HH4和HH5）基因检测技术规程Code of practice for molecular detection of lethal haplotypes (HH1, HH3, HH4 andHH5) in Holstein2019-05-29发布2019-06-29实施山东省市场监督管理局发布 DB37/T次前言1范围2规范性引用文件3术语和定义4检测原理4.1荷斯坦牛致死单借型HH1、HH3和HH4的检测4.2荷斯坦牛致死单借型HH5的检测5主要试剂6主要仪器设备7检测方法，7.1样本采集7.2DNA 提取7.3DNA浓度和纯度检测7.4引物序列7. 5 PCR 扩增7.6PCR产物琼脂糖凝胶电泳检测7.7测序分析8结果判定8.1致死单借型HH1测序结果判定与表述8.2致死单借型HH3测序结果判定与表述8.3致死单借型HH4测序结果判定与表述8.4致死单倍型HH5扩增条带判定与表述9废弃物的处理10检测过程中防止交叉污染的措施附（资料性附录）主要试剂，附录B（资料性附录）主要仪器设备附（规范性附录）PCR扩增产物. DB37/T率3000W，出水量2500mLhB. 11微波炉容积20L，尺寸262mm×452mmX365mmB. 12干燥箱温控范围50C~300C，箱内尺寸350mm×350m×450mmB. 13冰箱4 ℃, 20 ℃。8 DB37/T 3560—2019附C（规范性附录）PCR扩增产物C. 1PCR扩增的奶牛APAF1基因序列（用于HH1分析）1ATTTGTTACCTAATGGTTGGCTATTTAATTTTAGCTCATATAGAGAATATTTAAGCCTTT19AAAGTGACAAGATCACAGAAACAGAAAAATGTCTGATCTTGGCTCTGGTTATGTTTCTAA121GCAATTCCATTTTGTTCATAGGATGGTATAGACTGTGAGAATTTCCAGGAGTTTTTATCT181TTAAATGGACATCTTCTTGGACGACAGCCATTTCCTAATATTGTGCAACTGGGCCTCTGT241 GAACTGGAAACTTCAGAGGTTTATCGG[T/CJAAGCTAAGCTGCAGGCCAAGCAGGAGGTCGAT301AACGGAATGCTTTACCTGGAGTGGGTGTAAGTAGGTTAGGAGAGAAACCAGAGGGAGCAG361AGCGCTGACTATGTCATTATTTCTCAGGTAGCA注：[T/C】表示扩增片段的第268位点SNP突变C. 2PCR扩增的奶牛SMC2基因序列（用于HH3分析）TTTCTATAACTATCTTCCAGCTAAATCAGCACTCTTCATAATAATAGGGTAGCAGATTTG19CTTCAGCGCTTTGGCAAAAAGTGGTAAAATCAAGTTTTGATGGTATTTCTTTTGGCCTTC121 TTTTTTCAGGTCTTTAGTGGCTCTGTCATTAATCCTGTCCATGCTCCTTTTCAAACCTGC181CCCAATCTACATCCTGGATGAGGTCGATGCAGCCCTGGATCTTTCTCATACTCAGAATAT241 TGGACATATGCTACGTACTCATT[T/CJCACACATTCTCAGGTAAGAACCAAAAAGAGCCTCAG301AATAGTTCTAGGATTTGTTTTTCTAAAACTATTCTTTAGTAATGGTCAGTATATATAAGG361AATTTAGGATTGAAGAATACCAAGGTGTTGTATATCTCTTTAAATATATAATTCTATTCA421TATGGTTCCAGAAGGAAAGAGGCTTTCATCTCTTATTAAAGAAAGAGCCTGGAATTACAA481TAGCAGGTTATAGCATGAAGAGGAATCTATTTTTTTTTTTTTGTCACTTGAAATTATTTA541 GGTTAATTATTTTCTCTAGCTAGCTGAGAGAAGATGCACAATCAAAACAAGACTGT注：[T/C]表示扩增片段的第264位点SNP突变C. 3PCR扩增的奶牛GART基因序列（用于HH4分析）CCCATAGATGGCAGCCCACCAGGCTCCGCCATCCCTGGGATTCTCCAGGCAAGAACACTG61GAGTGGGTTGCCATTTCCTTCCCCCATGCATGAAAGTGAAAAGTGAAAGTGA