棉蚜的羧酸酯酶研究-对有机磷和拟除虫菊酯的抗性.pptVIP

1.由于编码解毒酶基因的DNA扩增导致的过量表达，如桃蚜的酯酶基因； 2.基因突变引起的杀虫剂靶标结构变构，如GABA受体和钠离子通道基因； 3.调节基因的变化导致的过量表达，如家蝇细胞色素P450基因。 Aphis gossypii resistant to omtehoate * * * * 棉蚜的羧酸酯酶研究－ 对有机磷和拟除虫菊酯的抗性 高希武 gaoxiwu@263.net.cn 背景知识 杀虫剂抗性的分子机制可分为三种类型： 酯酶的分类： Aldridge（1953）根据酯酶与有机磷的相互作用把酯酶分为三类 ： 1）A-酯酶，这类酶能耐受有机磷，并把它们作为底物进行水解； 2）B-酯酶，这类酶对对氧磷等有机磷很敏感，能被这些有机磷抑制； 3）C-酯酶，既不被有机磷抑制，又不能水解这些有机磷。 124.718 2575.810(1690.116-5095.187) 2.070±0.209 F20 85.78 1771.723(1064.214-2884.422) 2.051±0.367 F16 82.498 1703.85(1385.055-2125.041) 2.454±0.218 F12 26.586 549.083(352.380-765.225) 1.362±0.155 F8 21.833 450.936(319.436-560.607) 3.674±0.366 F4 5.107 105.487(74.353-151.708) 1.816±0.286 F0 抗性指数 resistance index LC50(mg/L) 斜率(slope) 代别Generation (Fi) 氰戊菊酯抗性选育品系及敏感品系棉蚜的生测结果 抗性和敏感品系棉蚜动力学常数及同功酶电泳分析 氧化乐果抗性和敏感品系棉蚜动力学常数的比较 1 2 氧化乐果抗性和敏感棉蚜酯酶同工酶分析 1 敏感棉蚜 2 抗性棉蚜 E1 E2 E3 E4 E5 敏感品系棉蚜羧酸酯酶同工酶扫描图 抗性品系棉蚜羧酸酯酶同工酶扫描图 抗性和敏感品系棉蚜羧酸酯酶基因的克隆及序列分析 羧酸酯酶基因的克隆 引物设计 正向引物CS1： 5’-gtGGATCCATGGAAGTCGTCATTGAACAAG-3’ BamH I 反向引物CA1： 5’-gtGAATTCCTAAACAATGGATTCAGATAATTC-3’ EcoR I M 1 2 3 4 kb 2.0 1.0 0.75 0.5 0.25 0.1 1.58kb 棉蚜羧酸酯酶全长基因的PCR扩增 泳道M：标准分子量DL2000；泳道1：未加模板的对照； 泳道2：敏感品系(SS)棉蚜cDNA作为模板；泳道3：抗性品系(RR)棉蚜cDNA作为模板；泳道4：敏感品系(WS)棉蚜cDNA作为模板 M1 M2 1 2 3 4 5 kb 21 5.1 2.0 1.0 0.75 0.5 0.25 1.58kb 0.8kb 3.0kb PCR结合酶切鉴定阳性克隆 泳道M1和M2：标准分子量?/EcoRⅠ+HindⅢ和DL2000；泳道1：PCR阴性对照；泳道2：重组子pGEM/Car-S为模板的PCR扩增；泳道3：重组子pGEM/Car-R为模板的PCR扩增；泳道4：重组子pGEM/Car-S经EcoRⅠ酶切；泳道5：重组子pGEM/Car-R经EcoRⅠ酶切 双酶切鉴定阳性克隆 泳道M1和M2：标准分子量?/ EcoRⅠ +HindⅢ和DL2000；泳道1：重组子pGEM/Car-S经BamH1和Pst1双酶切；泳道2：重组子pGEM/Car-R经BamH1和Pst1双酶切；泳道3：重组子pGEM/Car-S为模板的PCR扩增；泳道4：重组子pGEM/Car-R为模板的PCR扩增； M1 M2 1 2 3 4 kb 21 5.1 2.0 1.0 0.75 1.58kb 3.0kb 5’ATGGAAGTCGTCATTGAACAAGGTGCTCTAAAAGGACTTAAAAAAAAAACGCTATTGTCAAACAAACCTTACGTCAGTTTTCTAGGCATACCCTACGCTCAACCACCCGTTAACGACTTAAGATTCAAGGCTCCTGTCAAACATCCCGGATGGTCTGGAGTTTTAAATGCTGTTTCAGAAAGAGACAAATGCACGCAGTACGTTTTTATGACGAATCACATCGTTGGAA