常用细菌生化反应试验.pptxVIP

常用细菌生化反应试验 第1页/共26页 糖醇类代谢试验 糖发酵试验 甲基红试验 V-P试验 葡萄糖氧化／发酵试验（O/F试验） 七叶苷水解试验 Β－半乳糖苷渗透酶试验 第2页/共26页 糖发酵试验 原理 多糖－→单糖－→丙酮酸－→酸性产物(或产酸产气)－→pH↓ －→指示剂呈酸性变色(若产气者有气泡出现) 培养基：糖发酵管、半固体发酵管、微量发酵管 试剂：酚红、溴甲酚紫等 结果:培养基呈酸性变色 应用：观察细菌对糖度的 分解情况，常用于肠道杆菌的鉴定 第3页/共26页 糖发酵试验结果判断 反应现象 结果描述 酸性变色、有气泡 分解××糖产酸、产气 酸性变色、无气泡 分解××糖产酸、不产气 培养基不变色 不分解××糖 第4页/共26页 甲基红试验 原理：细菌分解糖，产生丙酮酸，进一步生成大量混合酸，使培养基pH维持在4.4以下，加入甲基红后，使甲基红呈现红色反应。此为甲基红试验阳性。 培养基：葡萄糖蛋白胨水 试剂：甲基红试剂 结果：加入试剂后，培养基呈现红色：+ 培养基不变色： － 应用：是肠道杆菌常用的生化反应试验，主要用于区别大肠肝菌和产气肠杆菌 第5页/共26页 伏－普试验（V-P试验） 原理：细菌发酵葡萄糖，产生丙酮酸，丙酮酸脱羧生成乙酰甲基甲醇，在碱性环境中乙酰甲基甲醇被氧化为二乙酰，二乙酰与蛋白胨中的精氨酸所含的胍基结合，生成红色化合物。 培养基：葡萄糖蛋白胨水 结果：加入试剂后，培养基呈现红色：+ 培养基不变色： － 应用：是肠道杆菌常用的生化反应试验，主要用于区别大肠肝菌和产气肠杆菌 第6页/共26页 葡萄糖 丙酮酸 大量混合酸 pH降至4.4以下 甲基红试剂 培养基变红 甲基红试验 第7页/共26页 葡萄糖 丙酮酸 乙酰甲基甲醇 二乙酰 V-P试剂 培养基变红 V－P试验 脱酸 第8页/共26页 葡萄糖发酵形成丙酮酸后的不同代谢途径 葡萄糖 丙酮酸 大量混合酸 pH降至4.4以下 甲基红试剂 培养基变红 乙酰甲基甲醇 二乙酰 V-P试剂 培养基变红 脱酸 第9页/共26页 蛋白质类代谢试验 靛基质试验 硫化氢试验 苯丙氨酸脱氨试验 尿素酶试验 第10页/共26页 靛基质试验 原理：细菌产生色氨酸酶，可分解蛋白胨中的色氨酸，生成靛基质（吲哚），靛基质与试剂对二甲基氨基苯甲醛作用，生成玫瑰靛基质。 培养基：蛋白胨水 试剂：靛基质试剂（含对二甲基氨基苯甲醛） 结果：加入试剂后，培养基出现红色液面：+ 培养基液面为黄色： － 应用：用于肠道杆菌的鉴定 第11页/共26页 靛基质试验原理 色氨酸酶 色氨酸 靛基质 （吲哚） 玫瑰靛基质 （玫瑰吲哚） 对二甲基氨基苯甲醛 第12页/共26页 硫化氢试验 原理：细菌分解蛋白质中的含硫氨基酸，生成硫化氢，硫化氢与培养基中的铁盐或铅盐结合生成黑色络合物。 培养基：含硫酸亚铁或醋酸铅的培养基 结果：培养基 变黑 为阳性，不变黑为阴性 应用：常用于肠道杆菌的鉴定 第13页/共26页 苯丙氨酸脱氨实验 原理：细菌的具有的苯丙氨酸脱氨酶，可使培养基中的苯丙氨酸脱氨，形成苯丙酮酸，后者与三氯化铁作用，形成绿色化合物。 培养基：苯丙氨酸琼脂 试剂：10％三氯化铁 结果：加入试剂后培养基呈现绿色为阳性 应用：多用于肠道杆菌的鉴定 第14页/共26页 苯丙氨酸脱氨试验原理 苯丙氨酸 苯丙氨酸脱氨酶 苯丙酮酸 10％三氯化铁 绿色化合物 第15页/共26页 尿素酶试验 原理：产生脲酶的细菌，能水解尿素生成氨和CO2，氨使培养基呈碱性变色。 培养基：尿素培养基 试剂：酚红指示剂 结果：培养基变红：+ 培养基不变色－ 应用：肠杆菌科属间鉴定 第16页/共26页 尿素酶试验原理 尿素 尿素酶 氨+CO2 培养基pH升高 酚红呈碱性变色 第17页/共26页 枸橼酸盐利用试验 原理：某些细菌能力利用培养基中的枸橼酸盐作为唯一的碳源，也能利用其中的铵盐 作为唯一碳源，细菌生长过程中分解枸橼酸盐产生碳酸盐和分解铵盐生成的氨，使培养基变碱，是指示剂呈碱性反应。 培养基：枸盐酸盐培养基 试剂：溴麝香草酚蓝（pH6.0以下呈黄色，pH7.6以上呈蓝色） 结果：培养基变蓝：+ 培养基不变色：－ 应用：肠杆菌科属间鉴别 第18页/共26页 枸橼酸盐利用试验原理 枸橼酸盐 铵盐 碳酸盐 氨 培养基pH下降 溴麝香草酚蓝 呈碱性变色 培养基变蓝 培养基 第19页/共26页 糖发酵试验 第20页/共26页 甲基红试验 第21页/共26页 靛基质试