外植体的选择消毒和接种.pptxVIP

外植体的选择消毒和接种;第四章 外植体的选择、消毒和接种;目的要求;第一节 外植体的选择;第一，选择优良的种质；;第二，选择健壮的植株；;第三，选择合适的部位；;第四，取材季节合理；;第五，考虑器官的生理状态和发育年龄；;第六，选择大小合适的外植体；;第二节 外植体的消毒、接种;外植体接种的一般步骤：;接种材料预处理:;接种前准备:;外植体消毒:;外植体剪切:;接种操作:;横插法与竖插法:; 接种时有一个敞口的过程，是极易引起污染的时期，主要由空气中的细菌和工作人员本身引起，因此，接种室要严格进行空间消毒。接种室内保持定期用1％~3％的高锰酸钾溶液对设备、墙壁、地板等进行擦洗。除了使用前用紫外线和甲醛灭菌外，还可在使用期间用70％的酒精或3％的来苏儿喷雾，使空气中灰尘颗粒沉降下来。; (1)在接种4h前用甲醛熏蒸接种室，并打开其内紫外灯进行灭菌； (2)在接种前20min，打开超净工作台的风机以及台上的紫外灯； (3)接种员先洗净双手，在缓冲间换好专用实验服，并换穿托鞋等； (4)上工作台后，用酒精棉球擦拭双手，特别是指甲处。然后擦拭工作台面； ; (5)先用酒精棉球擦拭接种工具，再将镊子和剪子从头至尾过火一遍，然后反复过火尖端处，对培养皿要过火烤干； (6)接种时，接种员双手不能离开工作台，不能说话、走动和咳嗽等； (7)接种完毕后要清理干净工作台，可用紫外灯灭菌30min。若连续接种，每5天要大强度灭菌一次。 ;接种前外植体消毒顺序:;第三节 培养条件; 不同培养目标采用的培养温度也不同，百合鳞片在30℃下再生的小鳞茎的发叶速度和百分率都比在25℃下的高。 桃胚在2～5℃条件进行一定时间的低温处理， 有利于提高胚培养成活率。用35℃处理草莓的茎尖分生组织3～5天，可得到无病毒苗。; 二、光照;3．光周期 试管苗培养时要选用一定的光暗周期来进行组织培养， 最常用的周期是16小时的光照， ８小时的黑暗，研究表明，对短日照敏感的品种的器官组织， 在短日照下易分化，而在长日照下产生愈伤组织，有时需要暗培养， 尤其是一??植物的愈伤组织在暗下比在光下更好。如红花、乌桕树的愈伤组织。; 环境的相对湿度可以影响培养基的水分蒸发， 一般要求７０～８０％的相对湿度， 常用加湿器或经常洒水的方法来调节湿度。湿度过低会使培养基丧失大量水分，导致培养基各种成分浓度的改变和渗透压的升高，进而影响组织培养的正常进行；湿度过高时，易引起棉塞长霉，造成污染。; 培养基中添加的盐类、 蔗糖、甘露醇及聚乙二醇类高分子化合物，影响到渗透压的变化。 １～２个大气压对生长有促进作用，２个大气压以上就对生长有阻碍作用， ５～６个大气压生长就完全停止，６个大气压细胞就不能生存。; 五、pH值; 一般来说当pＨ值高于６.５时，培养基完全变硬；低于５时，琼脂不能很好地凝固。由于高温灭菌会降低pＨ值（约０.２～０.３个pＨ）， 故在配制时常提高pＨ值０.２～０.３单位。; 氧气是组织培养中必需的因素。 瓶盖封闭时要考虑通气问题，可用附有滤气膜的封口材料。 通气最好的是棉塞封闭瓶口，但棉塞易使培养基干燥， 夏季易引起污染。固体培养基可加进活性炭来增加通气度,以利于发根。 培养室要经常换气，改善室内的通气状况。 液体振荡培养时，要考虑振荡的次数、振幅等，同时要考虑容器的类型、培养基等。 ;污染的原因及其预防措施;;;污染的预防措施;假设污染率为95%： ? 100块材料，接种于100支试管，即1块/支。 得率为：P=（1-95%）?100=5块无菌材料 ? 200块材料，接种于100支试管，即2块/支。 P1（2污）=95% ?95%=90.25% P2（1污1得或1得1污）=2 ? 95%?5%=9.5% P3（2得）=5% ? 5%=0.25% 若得到1支试管的无菌材料，至少要接种： 1/0.25%=400支，即接种800块材料，能得2块无菌材料。 ? 若按3块/支接种，需做8000支试管培养基，接入2.4万块材料，才能有1支试管的（得3块）无菌材料。;六、外植体的褐变及其防止措施;褐变;影响褐变的因素;褐变的防止措施;培养物的玻璃化现象及其预防措施;玻璃化现象及其产生原因;玻璃化现象的预防措施;培养阶段易出现的其他问题;;1.苹果无融合生殖矮生砧木的组织培养 2.矮牵牛花药培养及植