生物显微技术教学课件电子教案全套课件.pptx

生物显微技术;课程基础;细胞大小 ;第一章 显微镜;显微镜发展简史;第一节 光学显微镜;一、光学显微镜的原理与构造;性能 ;分辨率;放大率 ;显微镜的构造;;光学系统;物镜;目镜;二、常用光学显微镜 ;莱卡倒置显微镜 ;相差显微镜;;暗视野显微镜;荧光显微镜;;实体显微镜;;三、显微镜的使用与维护：;显微镜的维护;第二节激光扫描共聚焦显微镜 ;LSCM原理 ;;;;LSCM的生物学应用 ;第三节 电子显微镜;;透射电镜 ;透射电镜特点;超高压电镜;扫描电镜 原理：;;扫描电镜的特点;电子显微镜在生物学中的应用;当代显微镜的发展趋势;观察体外培养细胞首选的显微镜是： A 光镜 B 倒置相差显微镜 C 暗视野显微镜 D 实体显微镜 光镜组织切片和电镜组织切片： A均为超薄切片 B 均用化学染料染色C 均可制冷冻切片D 均为固定组织 扫描电镜是主要用于观察： A 生物膜内部结构细胞器的内部结构.B 组织和细胞的表面结构 C 细胞内的多糖 D 细胞核内的结构 激光共聚焦扫描显微镜可以观察细胞的 A 细胞内部结构 B 细胞的表面结构 C 细胞的立体结构 ;1982年，研制成功了世界第一台新型的表面分析仪器——扫描隧道显微镜（Scanning Tunneling Microscope,以下简称STM）。1986年，发明者宾尼和罗雷尔被授予诺贝尔物理学奖 原子力显微镜（Atomic Force Microscope, AFM） 横向力显微镜（Lateral Force Microscope, LFM） 统称为扫描探针显微镜（Scanning Probe Microscope, SPM）。; 隧道效应: 当具有电位势差的两个导体之间的距离小到一定程度时，电子将存在一定的几率穿透两导体之间的势垒从一端向另一端跃迁，这种电子跃迁的现象在量子力学中被称为隧道效应，而跃迁形成的电流叫做隧道电流。隧道电流有一种特殊的性质，既对两导体之间的距离非常敏感，如果把距离减少0.1纳米，隧道电流就会增大一个数量级。 ;扫描隧道显微镜工作工作过程; 1、原子级高分辨率。STM在平行和垂直于样品表面方向的分辨率分别可达0.1nm和0.01nm。 2、可实时地得到实空间中表面的三维图像。 3、样品不受损伤，保持完好。 4、可在真空、大气、常温等不同环境下工作，甚至可将样品浸在水和其它溶液中，不需要特别的制样技术，对生理状态下的活细胞表面结构也能进行研究。 5、扫描速度快，获取数据的时间短，成像快，有可能展开生命过程的动力学研究。 ;1．在STM的恒电流工作模式下，有时它对样品表面微粒之间的某些沟槽不能够准确探测，与此相关的分辨率较差． 2. STM所观察的样品必须具有一定程度的导电性，对于半导体，观测的效果就差于导体；对于绝缘体则根本无法直接观察。如果在样品表面覆盖导电层，则由于导电层的粒度和均匀性等问题又限制了图象对真实表面的分辨率． ; 在纳米范围内，STM已在表面科学、材料科学、生命科学等各个领域获得了广泛应用。 真空、大气和溶液条件下的DNA研究，球蛋白、胶原蛋白及红血球的研究等。 STM不仅能够对样品表面进行成像，而且还能在纳米尺度上对材料表面进行刻蚀与修饰。;;;;;;原子力显微镜（Atomic Force Microscope， AFM）; STM及随后发展起来的SPM技术是在纳米尺度上研究物质的特性和相互作用的有力手段，能够获得用其它实验方法很难得到的结果，为纳米科技的诞生与发展起了根本性的推动作用。 ? ;石蜡切片的制作;石蜡切片的过程;一、动物的处死;二、动物组织取材;三、固定;灌注式;3、固定液;醛类固定剂;非醛类固定剂;丙酮及醇类固定剂;混合固定剂;4%多聚甲醛磷酸缓冲液 pH7.4 成分： 4%多聚甲醛溶于1倍的磷酸缓冲液中， 1倍的磷酸缓冲液:PBS MV NaCl 140mM 58.44 KCl 2.7mM 74.55 NaH2PO4?12H2O， 10mM 358.14 KH2PO4 1.8mM 136.09 调pH至7.4。 ;Bouin’s液;固定组织时应注意： ①应力求保持组织新鲜，勿使其干燥，尽快固定处理。 ②组织块不易过大过厚，必须小于2cm×1.5cm×0.3cm，尤其是组织块厚度必须控制在0.3cm以内。 ③固定液必须有足够的量，