生物微生物的纯种分离与培养技术.pptxVIP

生物微生物的纯种分离与培养技术第1页/共40页 实验2-1 土壤中细菌、放线菌、酵母菌及霉菌的分离与纯化　　一、实验目的　　1. 学习、掌握从土壤稀释分离、划线分离各类微生物的技术。　　2. 学习从样品中分离、纯化出所需菌株。 　　3. 学习并掌握平板倾注法和斜面接种技术，了解培养细菌、放线菌、酵母菌及霉菌四大类微生物的培养条件和培养时间。 　　4. 学习平板菌落计数法。 第2页/共40页 实验2-1 土壤中细菌、放线菌、酵母菌及霉菌的分离与纯化　　二、实验原理 将待分离的样品进行一定的稀释，使微生物的细胞（或孢子）尽量呈分散状态，选用有针对性的培养基，在不同温度、通风等条件下培养，让其长成一个纯种单个菌落。　　要想获得某种微生物的纯培养，还需提供有利于该微生物生长繁殖的最适培养基及培养条件。微生物四大类菌的分离培养基、培养温度、培养时间见表2-1所示。 第3页/共40页 实验2-1 土壤中细菌、放线菌、酵母菌及霉菌的分离与纯化表2-1 微生物四大类菌的分离和培养要求 样品来源分离对象分离方法稀释度培养基名称培养温度/℃培养时间/d土样细菌稀释分离10-5，10-6，10-7牛肉膏蛋白胨30～371～2土样放线菌稀释分离10-3，10-4，10-5高氏1号285～7土样霉菌稀释分离10-2，10-3，10-4马丁氏琼脂28～303～5面肥或土样酵母菌稀释分离10-4，10-5，10-6马铃薯葡萄糖28～302～3细菌分离平板细菌单菌落划线分离10-2牛肉膏蛋白胨30～371～2第4页/共40页 实验2-1 土壤中细菌、放线菌、酵母菌及霉菌的分离与纯化　　三、实验材料　　1. 菌源土样　　2. 培养基 牛肉膏蛋白胨培养基，马丁氏培养基，高氏合成1号培养基，马铃薯葡萄糖培养基(制平板和斜面)，见附录Ⅲ。 　　3. 无菌水 250 mL锥形瓶，每瓶装99 mL无菌水(或95mL为分离霉菌用)，内装10粒玻璃珠。4.5 mL无菌水试管(每人5～7支)。 　　4. 其他物品 无菌培养皿，无菌移液管，无菌玻璃涂棒(刮刀)，称量纸，药勺，橡皮头，10%酚溶液。 第5页/共40页 实验2-1 土壤中细菌、放线菌、酵母菌及霉菌的分离与纯化　　（一）系列稀释平板法　　1. 取土样 选定取样点，按对角交叉（五点法）取样。先除去表层约2cm的土壤，将铲子插入土中数次，然后取2～10cm处的土壤。盛土的容器应是无菌的。将5点样品约1kg充分混匀，除去碎石、植物残根等杂物，装入已灭过菌的牛皮纸袋内，封好袋口，并记录取样地点、环境及日期。同时取10～15g，称重后经105℃烘干8h，置干燥器中冷却后再次称重，计算含水量。土样采集后应及时分离，凡不能立即分离的样品，应保存在低温、干燥条件下，尽量减少其中菌种的变化。 第6页/共40页 实验2-1 土壤中细菌、放线菌、酵母菌及霉菌的分离与纯化　　2. 制备土壤稀释液 称土样1g于盛有99mL无菌水的三角瓶中，充分振荡，此即为10-2浓度的菌悬液。用无菌移液管吸取悬液0.5mL于4.5mL无菌水试管中，用移液管吹吸三次，摇匀，此即为10-3浓度。同样方法，依次稀释到10-7。稀释过程需在无菌室或无菌操作条件下进行，稀释过程见图2-1。 第7页/共40页 实验2-1 土壤中细菌、放线菌、酵母菌及霉菌的分离与纯化图2-1 稀释分离过程示意图 第8页/共40页 实验2-1 土壤中细菌、放线菌、酵母菌及霉菌的分离与纯化　　3. 接种 分离不同的微生物类群采用不同的稀释度，参考表2-1进行选择。 从稀至浓分别吸取各浓度稀释液1mL于各平皿中（每个稀释度每种做2-3个培养皿，并注意做好浓度及培养基种类标记），同时做空白对照，倒入熔化后冷却至45℃～50℃左右的相应培养基，见图2-2，轻轻地摇动并旋转平皿，使菌悬液与培养基混合均匀，水平静置待凝，倒置于相应温度的培养箱中培养，2～5天后，观察菌落情况及计数。第9页/共40页 实验2-1 土壤中细菌、放线菌、酵母菌及霉菌的分离与纯化图2-2 稀释分离无菌操作图 1.包装纸套中取出无菌移液管；2.安装橡皮头，勿用手指触摸移液管；3.火焰旁取出土壤悬浮液；4.灼烧试管口及移液管吸液口；5.在火焰旁对试管中土壤悬浮液进行稀释；6.用手掌敲打试管，混匀土壤稀释液；7.从最小稀释度开始，将稀释液加入无菌培养皿中；8.将融化冷凉至45～50℃培养基倒入培养皿内；9.用毕的移液管装入废弃物缸中浸泡消毒后灭菌洗涤第10页/共40页 实验2-1 土壤中细菌、放线菌、酵母菌及霉菌的分离与纯化　　4. 培养 冷凝后，将平板倒置于在各自适宜的温度下培养，培养一定时间后观察。　　5. 计