NY_T 4030-2021CN 动物土拉杆菌病诊断技术.docx

ICS 11.220 CCS B 41 中 华 人 民 共 和 国 农 业 行 业 标 准 NY/T 4030—2021 动物土拉杆菌病诊断技术 Diagnostic techniques for animal tularemia 2021-12-15 发布 2022-06-01 实施 中华人民共和国农业农村部发布 I NY/T 4030—2021 目 次 前言 Ⅲ 1 范 围 1 2 规范性引用文件 1 3 术语和定义 1 4 临床诊断 1 4.1 流行特点 1 4.2 临床症状 1 4.3 病理变化 1 4.4 结果判定 1 5 革兰氏染色检查 2 5.1 材料准备 2 5.2 操作方法 2 5.3 结果判定 2 6 细菌分离 2 6.1 材料准备 2 6.2 样品准备 2 6.3 接种培养 3 6.4 生长特性 3 6.5 生化特性 3 6.6 结果判定 3 7 多重PCR 3 7.1 材料准备 3 7.2 样品前处理 4 7.3 模板DNA制备 4 7.4 操作方法 4 7.5 结果判定 4 8 实时荧光PCR 4 8.1 材料准备 4 8.2 样品前处理 5 8.3 模板DNA制备 5 8.4 操作方法 5 8.5 结果判定 5 9 ELISA 5 9.1 器 材 5 9.2 试 剂 5 9.3 操作方法 6 9.4 结果判定 6 10 综合判定 6 附录A(资料性) 土拉杆菌病诊断方法的适用性 7 附录B(资料性) 土拉杆菌病简介 8 Ⅱ NY/T 4030—2021 附录C(资料性)试剂的配制 9 附录D(资料性)PCR扩增产物的参考序列 11 Ⅲ NY/T 4030—2021 前 言 本文件按照GB/T1.1—2020 《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由农业农村部畜牧兽医局提出。 本文件由全国动物卫生标准化技术委员会(SAC/TC 181)归口。 本文件起草单位：中国动物卫生与流行病学中心、河南农业大学、吉林农业大学。 本文件主要起草人：张喜悦、孙翔翔、孙明军、王君玮、曲志娜、刘俊辉、王娟、魏荣、魏战勇、高云航、马 宏伟、赵永攀。 NY/T 4030—2021 动物土拉杆菌病诊断技术 1 范围 本文件规定了土拉杆菌病临床诊断、革兰氏染色检查、细菌分离、多重 PCR、 实时荧光 PCR 和 ELISA 等诊断技术的要求。 本文件适用于家兔、野兔、小型啮齿类动物、绵羊、牛、猪、狗、驼鹿和鸟类等动物土拉杆菌病的诊断。 各种诊断方法的适用性见附录 A。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本(包括所有的修改单)适用本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB19489 实验室生物安全通用要求 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 土拉杆菌病 tularemia 由土拉杆菌(Francisella tularensis)引起的一种人兽共患病，土拉杆菌病的实验室检测工作应符合 GB19489 的规定。土拉杆菌病的简介见附录 B。 4 临床诊断 4.1 流行特点 4.1.1 易感动物为兔(家兔和野兔)和啮齿类动物，尤其是田鼠、香鼠、松鼠和海狸鼠等小型啮齿动物最易 感。 A 型土拉杆菌对人和家兔具有极强的致病性，B 型土拉杆菌对人和家兔的致病性相对较小。多种哺 乳动物、鸟类、两栖动物和无脊椎动物均可感染本病，但易感性相对较低。 4.1.2 呈零星散发或地方性流行， 一年四季均能发病，但多见于春末夏初，即吸血昆虫活跃且非高温季节。 4.1.3 人类发病前多有接触野兔、食用兔肉等经历，或生活在自然疫源区(野生动物、家养动物和蜱、蝇、 虱子和蚊子等吸血昆虫和节肢动物较多的地区)。 4.2 临床症状 动物感染土拉杆菌后主要表现为发热、沉郁等症状，通常会引起败血症。 4.3 病理变化 4.3.1 易感动物(如家兔、野兔及小型啮齿类动物) 常见急性死亡，剖检可见以肝、骨髓和脾发生不规则分布的灰白色坏死灶为特征的败血症。脾脏通常 肿大，坏死灶大小不一，在有些