DB21_T 3084-2018羽绒制品中鹅绒的鉴别 PCR法和实时荧光PCR法.pdfVIP

ICS 59.080 W 59 备案号：62065-2019 DB21 辽 宁 省 地 方 标 准 DB21/T 3084—2018 羽绒制品中鹅绒的鉴别 PCR 法和实时荧光PCR 法 Identification of Goose Down Fiber in Feather and Down Products -PCR method and real-time fluorescence PCR method DB21/T 3084—2018 羽绒制品中鹅绒的鉴别 PCR 法和实时荧光PCR 法 1 范围 本标准规定了羽绒制品中鹅绒的 PCR 和实时荧光 PCR 鉴别方法。 本标准适用于羽绒制品。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 3.1 聚合酶链式反应 polymerase chain reaction 一种模拟天然 DNA 复制的体外扩增法，在 DNA 聚合酶催化下，以母链 DNA 为模板，以特定引物 为延伸起点，以 4 种单核苷酸（dNTP ）为底物，通过变性—退火—延伸的循环反应，使极少量的 DNA 的特定片段，在短短几小时内扩增上百万倍。 3.2 实时荧光PCR real-time fluorescence polymerase chain reaction 在 PCR 反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个 PCR 进程，最后通过曲线对未 知模板进行定量或定性分析的方法。 4 缩略语 下列缩略语适用于本文件。 bp ：碱基对（base pair ） C 值：每个反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数（cycle threshold ） t DNA ：脱氧核糖核酸（deoxyribonuleic acid ） DTT ：二硫疏糖醇 dNTP ：脱氧核苷酸三磷酸 （deoxyribonucleoside triphosphate ） 5 原理 用试剂盒法或其他等效 DNA 提取法提取样品中的DNA 。针对鹅的线粒体DNA 序列设计引物和探 针，通过单 PCR 、实时荧光 PCR 技术，对 DNA 中的鹅成分分别进行特异性扩增，根据实验结果，判 定样品中是否含有鹅绒。 1 DB21/T 3084—2018 6 试剂 6.1 实验用水应符合 GB/T 6682 中一级水的规格。 6.2 组织和毛发提取试剂盒 TaKaRa MiniBEST Universal Genomic DNA Extraction Kit Ver.5.0(TaKaRa Code.9765) 。参见附录A 中A.1 。 6.3 Premix Ex Taq™ (Probe qPCR) (TaKaRa Code. RR390A) 参见附录 A 中A.2 。 6.4 100%乙醇。 6.5 溴化乙锭溶液。 6.6 DNA Laddar Marker 。 7 设备与器具 7.1 PCR 仪 7.2 实时荧光定量 PCR 仪 7.3 电泳装置 7.4 凝胶成像仪 7.5 冰箱：4 ℃~20 ℃ 7.6 天平：精度为 0.0001 g 7.7 分析研磨机 7.8 微孔干浴器或水浴锅 7.9 瞬时离心机 7.10 涡旋混合器 7.