第四章抗体制药.pptVIP

第三十页，共六十四页。 一、人鼠嵌合抗体 抗原抗体结合功能—抗体可变区（V） 同种性免疫源性—抗体稳定区（C） 在基因水平上将鼠源单抗的H和L链可变区基因分离出来，分别与人Ig的H和L链的稳定区（C）基因连接成人-鼠嵌合抗体的H和L链基因，再共转染骨髓瘤细胞，就能表达完整人-鼠嵌合抗体。 第三十一页，共六十四页。 二、改形抗体（CDR移植抗体） Ig 分子中参与构成抗原结合部位的区域是H和L链V区中的互补决定区（CDR区），而不是整个可变区。 H和L链各有三个CDR，其它部分称框架区。 用鼠源单抗的CDR序列替换人Ig分子中CDR序列，则可使人的Ig分子具有鼠源单抗的抗原结合特异性。可消除免疫原性。 第三十二页，共六十四页。 第三十三页，共六十四页。 三、小分子抗体 基因工程小分子抗体仅表达鼠源单抗的V区片段，相对分子量为原抗体的1/80～1/3。即保留CDR区，而Ig 分子中的C区不表达。 小分子抗体类型有：①Fab片段抗体；②Fv抗体；③单链抗体；④单域抗体；⑤最小识别单位。 第三十四页，共六十四页。 单链抗体的优点： ①可去除非特异性反应的竞争性表面蛋白，肿瘤显象背景更加清晰性。 ②易渗透肿瘤组织中增加药物治疗浓度。 ③免疫源性小，可消除人抗鼠的排异反应。 第三十五页，共六十四页。 单链抗体大多在大肠杆菌中表达，有三种形式： ①直接在细胞质中表达； ②与其它菌体融合表达融合蛋白； ③分泌表达具有功能的单链抗体。 第三十六页，共六十四页。 四、双功能抗体 双功能抗体就是双特性抗体。它是一种非天然性抗体。其结合抗原的两个臂具有不同的特异性。 构建方法： ⒈ 化学交联法 ⒉ 生物学方法（杂种-杂交瘤） ⒊ 基因工程法 第三十七页，共六十四页。 五、抗体融合蛋白 抗体融合蛋白广义属双功能抗体。 类型： ①配基-配基型融合蛋白； ②配基-Ig型嵌合蛋白； ③配基-Fv型融合蛋白； ④受体-Fv型融合蛋白； ⑤酶-抗体型融合蛋白； 第三十八页，共六十四页。 第四节 基因工程抗体和抗体工程 抗体研究进展3个阶段： 　①1890年白喉抗毒素，多克隆抗体； 　②1975年杂交瘤技术单克隆抗体； 　③1994年基因工程抗体。 第三十九页，共六十四页。 一、噬菌体抗体库技术的基本方法 ⒈ 获取目的基因 ⒉ 抗体库技术的载体 ⒊ 淘筛 ⒋ 表达与鉴定 第四十页，共六十四页。 二、噬菌体抗体库技术的特点 ⒈ 模拟天然全套抗体库 ⒉ 避开了人工免疫和杂交瘤技术 ⒊ 可获得高亲和力的人源化抗体 第四十一页，共六十四页。 三、基因工程抗体表达 ⒈ 原核细胞表达 ⒉ 真核细胞表达 ⒊ 转基因植物表达 ⒋ 转基因动物表达 第四十二页，共六十四页。 第五节 抗体诊断试剂 ⒈ 鉴定病原菌的抗体试剂 ⑴ 常用诊断血清的品种和用途 ①沙门氏菌属诊断血清 ②志贺氏菌属诊断血清 ③病原性大肠埃希氏菌诊断血清 一、血清学鉴定用的抗体类试剂 第四十三页，共六十四页。 ⑵ 诊断血清的制备步骤 　①制备细菌抗原 　②免疫动物和制备抗体血清 ⑶ 诊断血清诊断方法 ⒉ 乙型肝炎病毒表面抗原的反向被动血凝诊断试剂 ⒊ 妊娠诊断试剂 ⒋ 抗ABO血型系统血清 第四十四页，共六十四页。 第四十五页，共六十四页。 第四章 抗体制药 第一页，共六十四页。 第一节 概述 1890年Behring和北里柴三郎发现白喉抗毒素，建立了血清疗法，开创了抗体制药。 1937年Tiselius用电泳法将血清蛋白分离为白蛋白、α、β、γ球蛋白，并证明抗体活性主要存在于γ球蛋白组分。 第二页，共六十四页。 抗体是指能与相应抗原特异性结合具有免疫功能的球蛋白。 抗体的产生：机体免疫系统受抗原刺激后，B淋巴细胞被活化增殖和分化为浆细胞，由浆细胞合成和分泌的球蛋白。 第三页，共六十四页。 20世纪60年代发现多发性骨髓瘤是浆细胞癌变形成的恶性增殖性疾病。病人血清中出现同抗体结构类似的球蛋白， 统称为免疫球蛋白（immunoglobulin，Ig）。所以Ig是化学结构的概念，而抗体是生物学功能的概念。 第四页，共六十四页。 多克隆抗体：病原微生物含有多种抗原决定簇的抗原物质，因此这些抗体制剂也是多种抗体的混合物，故称多克隆抗体。 第五页，共六十四页。 1975年Kohler和Milstein首先利用B淋巴细胞杂交瘤技术制备出单克隆抗体（monoclonal antibody McAb）。 单克隆抗体具有高度特异性、均一性、来源稳定、可大量生产等特点，为抗体制备和应用提供了全新的手段，还促进了基础和临床医学的发展。 第六页，共六