理学核酸代谢.pptxVIP

理学核酸代谢;限制性内切酶：能够识别双链DNA上特定核 苷酸序列并进行切割的核酸内切酶。P285;1.核苷酸的生物合成P289;2.基本概念P300;中心法则(The Central Dogma)：由DNA决定RNA的碱基顺序，又由RNA决定蛋白质中的Aa顺序，这叫中心法则，也叫信息流。P301;(一) DNA的复制;全保留复制;第8页/共69页;2.DNA的半不连续复制P318 (Semidiscontinuous replication);要点：;②另外一条链(随后链,lagging strand)的合成是不连续的，复制叉打开后，也是按5’→3’方向即母链的3’→5’方向(与复制叉方向相反)合成若干个短片段，然后通过连接酶连接起来，所以整个过程是半不连续的。;冈崎片段P308;(2)条件P303-306;(1)引物酶;(2) DNA聚合酶;DNA聚合酶Ⅱ：多亚基酶，聚合作用，但聚合活力很低；具有3’→5’外切酶活性。 DNA聚合酶 Ⅲ：真正起复制作用的酶 由10种亚基组成的不对称二聚体 α、ε和θ构成核心酶 α亚基有聚合活性 ε亚基有3’→5’外切酶活性;(3)连接酶;(4)解螺旋酶（解链酶）;(5)单链结合蛋白（SSB）;(6)拓扑异构酶（旋转酶）;;(3)规律;;③DNA复制可以是单向的，也可以是双向的,后者更常见； 原核生物的复制从一个起始点开始，同时向两个方向进行，称为双向复制，复制中的DNA成为?状 ④两条DNA链的合成都是朝5’→3’方向进行； ⑤DNA复制严格遵守碱基互补配对原则，准确复制；;⑥复制是半不连续的，前导链是连续合成的，随后链是不连续合成的，通过连接酶把若干片段连接起来； ⑦各个短片段开始复制时，都需要RNA引物； ⑧复制有多种机制，会因环境的不同(酶的丰度、温度、营养条件等)而有不同的起始机制及链的延长方式。;5.复制过程(大肠杆菌)P307;(1)起始;引物合成：引发体引导引物酶到达适当的位置合成引物。;(2)延长; 随后链的模板绕DNA聚合酶向后回折成环，复制叉 上的DNA聚合酶III全酶同时合成前导链和随后链。;(3)终止;（4）真核生物的DNA复制P310;真核生物复制的终止:染色体DNA呈线性，复制在末端停止。;第34页/共69页;(二)逆转录作用P312;前病毒学说（Temin）——逆转录过程 生物学意义：扩充了中心法则；有助于致癌机制、艾滋病起因的研究；与真核细胞分裂和胚胎发育有关；逆转录酶是分子生物学重要工具酶。;依赖RNA的DNA聚合酶;7.DNA的损伤与修复P312;;（2）DNA的切除修复;（3）DNA的重组修复;8.突变(Mutation)P315;二、RNA的生物合成;转录与复制的区别主要有：;2.RNA聚合酶(转录酶);大肠杆菌RNA聚合酶组成与功能P327;3.RNA的转录过程(大肠杆菌)P317-319;启动子：指RNA聚合酶识别，结合和开始转录的一段DNA序列。P317 转录因子：RNA聚合酶在进行转录时常需一些辅助因子(蛋白质)参与作用，称之为转录因子。 终止子(terminator)：提供转录停止信号的DNA序列称终止子。 终止因子：协助RNA聚合酶识别终止信号的辅助因子(蛋白质)。;(1)起始阶段;(2)延长阶段;(3)终止阶段;;依赖于?因子的终止;真核生物的RNA合成比原核生物复杂得多，RNA聚合酶有三种： Ⅰ（A）核仁——rRNA前体 Ⅱ（B）核质——mRNA前体 Ⅲ（C）核质——tRNA和5sRNA前体;DNA模板功能抑制剂：放线菌素D、烷化剂、嵌入染料。P325 RNA聚合酶的抑制剂： 利福平——与原核生物RNA聚合酶的β亚基结合，阻止RNA合成；P325 α-鹅膏覃碱——抑制真核生物RNA聚合酶Ⅱ和Ⅲ的活性，阻断mRNA的合成。P321;5.转录后的加工;真核：100多个核苷酸残基被甲基化修饰，多数在核糖2’-OH上；RNaseⅢ及其它核酸内切酶裁切。;(2) tRNA前体的加工P320;(3) mRNA前体的加工;磷酸酶;第61页/共69页;;6.RNA指导下的RNA的合成(RNA复制)P324;四、基因工程简介P325;2.基因工程的操作技术;聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction, PCR);PCR技术每轮循环包括：; PCR技术的发明;感谢观看!