分子生物学与基因工程课件-三七素的生物合成.pptxVIP

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2023-05-07 发布于浙江
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分子生物学与基因工程课件-三七素的生物合成.pptx

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三七素的生物合成;研究背景及途径设计 Gloxdh蛋白表达、纯化、酶活测定 Oah蛋白表达、纯化、酶活测定 AAE,oxs蛋白表达、纯化 panE蛋白表达、纯化、酶活测定 ectA,BAHD蛋白表达、纯化、酶活测定 BAHD的可溶性突变;1. 研究背景及途径设计;酶;Gloxdh ;180 kDa 140 100 80 60 45 35 25;;180 kDa 140 100 80 60 45 35 25;;180 kDa 140 100 80 60 45 35 25;两个来源的Vmax值接近，酿酒酵母Km值更小。;180 kDa 140 100 80 60 45 35 25 15;;6. EctA，BAHD蛋白表达、纯化及酶活测定;;7. BAHD可溶性突变;下一步实验计划;7.1 BAHD加标签（MBP标签和GST标签）;L7N:L亮氨酸3.800, N天冬酰胺-3.50 I122E:I异亮氨酸4.500,E谷氨酸-3.500 F 185,193,197,207 Y:F苯丙氨酸2.800,Y酪氨酸-1.300 三个突变体：NE,YYYY,NEYYYY; M BAHD(NE) BAHD(YYYY) BAHD(NEYYYY) ;BAHD;I4,6,12D: I异亮氨酸4.500, D天冬酰酸-3.50 氮端替换: MKITVRGSEMV 替换 MSSIQILSTTTI;7.4 分子伴侣;CAT CATa ;CAT BAHD;下一步实验计划