MS培养基及配制注意事项.docxVIP

一、MS 培养基母液的配制 母液 编 种 成 分 规定量 浓缩 倍数 称取量 母液 体 积 配制 1 升 培养基吸 号 类 （mg） （ml） 取量定容 大 KNO3 1900 10 19000 量 NH4NO3 1650 10 16500 1000 1 元 MgSO4·7H2O 370 10 3700 100 素 KH2PO4 170 10 1700 2 CaCl2·2H2O 440 10 4400 1000 100 MnSO4·4H2O 22.3 100 2230 ZnSO4·7H2O 8.6 100 860 3 微 H3BO3 6.2 100 620 量 KI 0.83 100 83 1000 10 元 Na2MoO4·7H2O 0.25 100 25 素 CuSO4.5H2O4 0.025 100 2.5 CoCL2.6H2O 0.025 100 2.5 4 铁 Na2-EDTA 37.3 100 3730 1000 10 盐 FeSO4.4H2O 27.8 100 2780 甘氨酸 2.0 100 100 5 有 盐酸吡哆醇 0.5 100 25 机 盐酸硫铵素 0.1 100 5 500 10 物 烟酸 0.5 100 25 6 肌酸 100 100 5000 500 10 注意： 1．大量元素按照使用时高 10 倍的数值称取，分别将各种化合物称量后，除CaCl2·2H2O 单独配制外，其余化合物混合在500ml 烧杯中加适量蒸馏水溶解，用玻璃棒搅拌促溶，倒入 1000ml 容量瓶中用蒸馏水定容至刻度，置小口瓶中保存，贴上标签注明化合物名称（或编号），浓缩倍数，配制日期和配制者姓名，CaCl2·2H2O 配制同上置于另一小口瓶中。 微量元素母液的配制 按要求浓缩 100 倍的数值称取，分别将各种化合物称量除铁盐（ FeSO4·7H2O 和 Na2-EDTA.2H2O）作为一组单独配制外，其余化合物可混合置于烧杯内加少量蒸馏水溶解后， 定容在 1000ml 容量瓶中，置小口瓶中保存，贴上标签。 铁盐配制将FeSO4·7H2O 和 Na2-EDTA.2H2O 分别溶于 450ml 蒸馏水中，加热，（很重要）不断搅拌，溶解后，两液混合，调 PH 至 5.5 加水定容至 1000ml，置于小口瓶中，贴上标签。4．有机物母液配制，按母液要求浓缩50 倍，除蔗糖按 3%单独临时称量外，其余分别称量后，溶解，定容在 500ml 容量瓶中，置于小口瓶中保存，贴上标签。 5．母液最好在 2~4℃的冰箱中贮存，特别是有机类物质，贮存时间不宜过长，无机盐母液最好在一个月内用完，如发现有霉菌和沉淀产生，就不能再使用。 制备母液和营养培养基时，所用蒸馏水或无离子水必须符合标准要求，化学药品必须是高纯度的（分析纯）。 称量药物采用高灵敏度的天平，每种药品专用一药匙。 ．生长调节剂母液配制： 为了操作方便，节约时间，生长调节剂也可如同配制母液一样，先配成原液，这样配制培养基时只要稍加计算，按需要量取即可。 3不同药品在配制时若不溶于水，可用少量不同的溶剂先溶解，萘乙酸（ NAA），吲哚乙酸（IAA）,赤霉素（GA ），2，4-D 等生长素和玉米素（ZT）可先用少量 95%酒精溶解，然后加水，如溶解不完全再加热。激动素（KT）和 6-苄基嘌呤（BA）可溶于少量 1mol/L 的盐酸中，叶酸需用少量稀氨水溶解。 3 称取 50mg 生长调节物质，溶解后，在100ml 的容量瓶中定容，配制的母液每毫升则含有生长调节物质 0.5mg，配制后一般要求在低温（0~4℃）保存，配制培养基时如每升（1000ml） 需添加的生长调节剂物质为 0.5mg 时，则取 1ml 母液即可。 二、培养基配制和灭菌 一．养培养基配制程序 (一).母液吸取量的计算 配制培养基的升数 公式 1：母液吸取量= 母液体积（CC）×—————————— 母液浓缩倍数 培养基要求的含量 公式 2：母液吸取量= ———————————（各种生长调节剂） 母液每 CC 的含量 （二） 各种母液按顺序编号排列 大 量 元 素 ； B.CaCl .2H O ； C. 微 量 元 素 ； D. 铁 盐 ； E. 有 机 物 ； 2 2 F．生长素萘乙酸（NAA）：配制 0.5mg/ml 的 NAA 称取 50mg ， NAA 用少量 95% 酒精溶解 后加蒸馏水定容至 1000ml；G..细胞分裂素、激动素（KT）配制 0.5mg/ml 的 KT 称 50mgKT 用少量 1N HCL 溶解后,加蒸馏水定容至 100ml。 (三) 配制培养基（1000ml） 琼脂: 称取 5~7g 琼脂，加入 300ml 蒸馏水，加热溶解直至完全溶解为止. 蔗糖 3%用质量较好的白糖代替，称取 30g 白糖，