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分子生物学在水产养殖学科中的应用 摘要：近年来，随着人们生活水平的不断提高，大西洋鲑產、鳕鱼等高值水产品的消费量逐年增大。随着水产品贸易量增加，加工方式多样化，水产品及其加工品相关的商业欺诈现象也在增加，采用低值水产品冒充高值水产品的行为时有发生，不仅破坏了水产品贸易的公平性，也损害了消费者的合法权益，甚至带来食品安全问题。因此建立快速、简便的水产品种类鉴定方法，对于规范水产品市场、保护消费者权益至关重要，对于维护水产品产业的健康发展具有重要的意义。 关键词：真伪鉴别;提取;三文鱼;鳕鱼 1 水产品鉴定方法概论 传统的水产品鉴定方法主要依据水产品的外部形态和解剖特征，但这种方法不适用于加工后的水产品种类鉴定。随着现代分子生物学技术的发展，已经被证明几乎是所有生物最主要的遗传物质，基于技术的分子生物学方法在鉴定食品真伪方面发挥越来越重要的作用。本篇综述总结了大量研究基于技术的水产加工品种类鉴定方法的论文。 针对不同水产加工品进行提取方法的比较。以冻鱼块、烤鱼片、鱼罐头共种主要水产加工品为研究对象，比较法、改良法、酚氯仿法、法以及种试剂盒法共种方法对种主要水产加工品提取效果。通过比较得率以及纯度对各提取方法进行评价，并采用方法对实验样品的真伪进行了初步鉴别。结果表明9种提取方法对于3种水产加工品所提取得率相差较大，对于冻鱼块采用深加工食品提取试剂盒提取得率最高（1.223μg/mg）,纯度（A260/A280）为2.0；对于烤鱼片采用法提取得率最高（0.505μg/mg），纯度（A260/A280）为2.03;对于鱼罐头采用法提取得率最高为（0.594μg/mg）,纯度（A260/A280）为1.93。所提取可满足后续鉴定实验的要求。 利用方法对大西洋鲑以及市场上常被用来冒充大西洋經的虹鳟和白斑红点鲤进行鉴别，对三种鱼类和部分序列测序，利用和摘要软件对测得序列进行分析，计算三种鱼类碱基组成种间遗传距离和种内遗传距离，利用邻接法构建了分子系统树。结果表明：三种鱼类种间遗传距离显著大于种内遗传距离，三种鱼类基因较基因相对保守，三种鱼类在系统树分类中分别形成各自独立的分支，表明以和基因作为标记基因可以对大西洋鲑及常被用来冒充大西洋鲑的虹鳟和白斑红点鲑进行鉴别。采用对大西洋鲑及常被用来冒充大西洋鮭的虹鳟和白斑红点鼓力的线粒体基因部分序列进行分析，建立限制性内切酶图谱，选择共五种限制性内切酶用于三种鱼类的分析。采用限制性内切酶对三种鱼类线粒体基因进行酶切，酶切结果与分析结果吻合，没有非特异性酶切条带的出现，酶切片段均能通过电泳进行明显的区分。结果表明，选取五种限制性内切酶，共六种组合方式对三种鱼类进行鉴别，建立的方法能快速鉴别大西洋娃、虹鳟和白斑红点娃。 采用方法对市售鳕鱼样品进行鉴别研究，通过对鳕鱼样品线粒体和部序列进行測序，鉴别各商品化鳕鱼样品中鱼源性成分，以判定其与标签中注明是否相符。结果显示，种冻鳕鱼块样品中，有种存在贴标不明确的现象，未标明物种的冻鳕鱼块主要为价格较便宣的狭鳕；采用油炸、水煮、烘干后的鳕鱼样品依然可以进行准确鉴别；采集的种烤鳕鱼片样品測序结果均与商品名称不符，四种烤鱼片样品分析结果分别为网纹狮子鱼、、月尾兔头純暗纹东方純黑尾吻缓。结果表明利用线粒体基因和基因通过方法可以对市场上常见鳕鱼加工品原料真伪进行鉴别。 2 水产品真伪鉴别方法 2.1 理化检验法 理化检验法是根据物种某些组分的理化性质的差异进行检验，从而区分不同物种的方法。理化检验法主要包括成分分析法、蛋白质分析法和免疫学分析法等。 2.1.1 成分分析法 成分分析是采用理化分析方法对成分的组成和数量进行分析，从而实现不同物种的区分，常用的检验手段是色谱分析和光谱分析。根据检测的成分，成分分析法可以分为特定成分分析和广谱成分分析。 特定成分分析是对检材中特定成分的含量和结构的差异进行分析，达到物种鉴定的目的。特定成分分析对象，常常是某个物种的特殊成分，或者具有特殊结构的组分。 广谱成分分析是利用理化手段对样品的化学组成进行全面分析，来确定样品种类的一类方法。广谱成分分析常用于对样品的研宄背景不清楚的情况，通过全面分析，找出其组成成分、含量等与其他样品的异同，从而实现不同样品的检验鉴定。 2.1.2 蛋白质标记分析法 蛋白质标记是建立在蛋白多态性基础上的一种方法。蛋白质是基因表达的产物。不同的物种，由于遗传信息的不同，其蛋白质的氨基酸序列、结构以及组成等存在差异，因此可以通过对样本的蛋白质进行分析，确定不同的物种。蛋白质标记中应用最多，也是最普遍的方法是采用同工酶进行鉴定同工酶是一系列分子结构和理化性质不同但具有相同活性的蛋白质分子在一定水平上显示水平的差异。 在生物体中，同工酶具有特殊的生理作用，在动植物中普遍存在。已有研究釆用同工酶的方法进行物种鉴定。萝莉