细胞生物学研究方法4学时.pptxVIP

第二章 细胞生物学研究方法 Chapter 2 Methods in Cell Biology Research第一页，共五十一页。细胞形态结构的观察方法Methods for observing cell morphology and structures细胞组分的分析方法Methods for analyzing cell constituents细胞培养、细胞工程Cell culture and cell engineering细胞及生物大分子的动态变化Dynamic analysis of biological macromolecules in cells用于细胞生物学研究的模式生物Model organisms in cell biology 第二页，共五十一页。第一节 细胞形态结构的观察方法各类细胞直径的比较第三页，共五十一页。单式显微镜光学显微镜 研究用显微镜普通光学显微镜 倒置相差显微镜复式显微镜微分干涉显微镜 显微镜荧光显微镜激光共聚焦显微镜电子显微镜透射电子显微镜扫描电子显微镜扫描隧道显微镜第四页，共五十一页。光学显微镜的分辨率resolution of optical microscope对任何显微镜来说，最重要的性能参数是分辨率，而不是放大倍数。分辨率(resolution)——区分开两个质点间的最小距离.第五页，共五十一页。0.2um0.2nm0.1nm普通光镜的最大分辨率是0.2μm。第六页，共五十一页。一、普通复式光学显微镜技术1、普通光学显微镜 light microscope第七页，共五十一页。2、相差显微镜 phase contrast microscope将透过标本的可见光的光程差变成振幅差，提高对比度，构造上的特殊之处：－环形光阑（condenser annulus）－相位板（annular phase plate）用途：可以观察未经染色的标本和活细胞第八页，共五十一页。F. Zernike于1935年发明并因此获1953年诺贝尔物理奖第九页，共五十一页。倒置相差显微镜 inverted phase contrast microscope物镜与照明系统颠倒，前者在载物台之下，后者在载物台之上，可以用于观察培养皿中的活细胞。第十页，共五十一页。3、微分干涉显微镜 differential interference contrast (DIC) microscope在相差显微镜原理的基础上，利用两组平面偏振光的干涉，加强影像的明暗效果，能显示结构的三维立体投影。与相差显微镜相比，立体感更强第十一页，共五十一页。4、荧光显微镜 fluorescence microscope为落射式照明，即光源通过物镜投射于样品光源为波长较短的光，分辨力强用于观察细胞组分特异发出的自然或标记荧光第十二页，共五十一页。集多种功能于一体的——万能研究显微镜兼有明视野、相差、微分干涉、荧光、显微摄影等功能，是高级研究仪器。第十三页，共五十一页。5、激光共聚焦扫描显微镜 laser confocal scanning microscope激光作光源；通过检测器前小孔成像；扫描激光聚焦点也是瞬时成像焦点——共聚焦。分辨力为普通光镜的倍.第十四页，共五十一页。荧光显微镜与扫描共焦显微镜的比较（小鼠肾小球）Zeiss C-Apochromat 40x/1.1 W CorrZeiss Plan-Neofluor 40x/1.30 OilEpi-fluoresceneConfocalAlexa Fluor 488 wheat germ agglutinin, a green-fluorescent lectin, was used to label elements of the glomeruli and convoluted tubules. The filamentous actin prevalent in glomeruli and the brush border were stained with red-fluorescent Alexa Fluor 568 phalloidin. The nuclei were counterstained with the blue-fluorescent DNA stain DAPI.Molecular Probes FluoCells? prepared slide #3 (F24630)梁凤霞提供第十五页，共五十一页。荧光观察细胞结构细胞内的动态变化FRETFRP第十六页，共五十一页。鲁斯卡(1906～1988)，德国物理学家，1932年研制第一台电子显微镜，1986年获诺贝尔物理奖。二、电子显微镜技术 Electron microscopy第十七页，共五十一页。