任务24 玉米中黄曲霉毒素B1的测定.pptxVIP

项目二 谷物检验 农产品检测技术 一、测定意义 二、测定方法及测定原理 三、仪器用具 四、试剂 五、操作步骤 六、结果表述 项目二 谷物检验 任务24 黄曲霉毒素B1的测定 一、测定意义 黄曲霉毒素B1的测定 黄曲霉毒素（AFT）是黄曲霉和寄生曲霉等某些菌株产生的双呋喃环类毒素。黄曲霉毒素是一种存在于花生、玉米、大豆、稻米、小麦等粮食和油类产品中毒性极高，对人类的健康和生命会造成严重的威胁的物质，被列为三大致癌物质之一。一旦污染粮食和饲料,会严重危害人和动物健康,造成经济损失。 动物食用黄曲霉毒素污染的饲料后，在肝、肾、肌肉、血、奶及蛋中可测出极微量的毒素。黄曲霉毒素及其产生菌在自然界中分布广泛。 一、测定意义 黄曲霉毒素B1的测定 黄曲霉毒素已经发现的有Bl 、B2、B2a、G1、G2、M1、M2、Q1、Q2a等20多种，在天然食物中以黄曲霉毒素B1最为多见，致癌性也最强，因此国家质检总局规定黄曲霉毒素B1是大部分食品的必检项目之一。 GB 2761-2017 《食品安全国家标准 食品中真菌毒素限量》规定：玉米、玉米面（渣、片）及玉米制品中黄曲霉毒素B1的限量为20µg/kg；稻谷、糙米、大米中黄曲霉毒素B1的限量为10µg/kg；小麦、大麦、小麦粉、麦片、其他谷物中黄曲霉毒素B1的限量为5µg/kg。 二、测定方法及测定原理 测定方法：LS/T 6111-2015《粮油检验 粮食中黄曲霉毒素B1测定 胶体金快速定量法》 胶体金快速定量法 测定原理：试样提取液中黄曲霉毒素B1与检测条中胶体金微粒发生呈色反应，颜色深浅与试样液中黄曲霉毒素B1含量相关。用读数仪测定检测条上检测线和质控线颜色深浅，根据颜色深浅和读数仪内置曲线自动计算出试样中黄曲霉毒素B1含量。 黄曲霉毒素B1的测定 三、仪器用具 1、粉碎机（可使试样粉碎后全部通过20目筛） 2、天平（分度值0.01g） 3、移液器 4、涡旋振荡器 5、离心机（转速不低于4000r/min） 6、黄曲霉毒素B1胶体金快速定量检测条 7、孵育器（可进行45℃±1℃恒温孵育） 8、读数仪（测定并显示胶体金定量检测条的测定结果） 9、针头式滤器（滤膜材质规格为RC15，孔径0.45µm） 黄曲霉毒素B1的测定 四、试剂 1、提取液：70％甲醇溶液（体积分数）。 2、稀释缓冲液：由胶体金检测条配套提供。 黄曲霉毒素B1的测定 五、操作步骤 1、试样制备 取有代表性的样品500g，用粉碎机粉碎至全部通过20目筛，混匀。 黄曲霉毒素B1的测定 五、操作步骤 2、提取 （1）准确称取10.00g试样于100mL具塞锥形瓶中，加入20.0mL提取液，密闭，用涡旋振荡器振荡1min～2min. （2）静置后用滤纸过滤，或取1.0mL～1.5mL混合液于离心管中，用离心机(4000r/min)离心1min。 （3）取滤液或离心后上清液100µL于另一离心管中，加入1.0mL稀释缓冲液，充分混匀待测。如样品为小麦，需将稀释后的混合提取液用针头式滤器过滤，即为待测溶液。 黄曲霉毒素B1的测定 五、操作步骤 3、测定 （1）将胶体金检测条从冷藏状态（2℃～8℃）取出放置至室温。将孵育器预热至45℃。将检测条平放在孵育器凹槽中，打开加样孔。 （2）准确移取300µL待测溶液加入检测条加样孔中，关闭加样孔及孵育器盖。 （3）孵育5min后，取出检测条，插入读数仪。选择读数仪的黄曲霉毒素B1检测频道并设定基质为00（MATRIX 00），开始样品测定，测定需在2min内完成，读数仪自动显示样品中黄曲霉毒素B1的含量。 黄曲霉毒素B1的测定 说明： 1、孵育5min后，取出检测条，观察C线（质控线）和T线（检测线）显色情况。若出现下述情况，视为无效检测。 a）C线不出现； b）C线出现，但弥散或严重不均匀； c）C线出现，但T1或T2线弥散或严重不均匀。 2、若读数仪显示“＋30ppb”，需移取300µL 待测溶液于离心管中，加入1.0mL稀释缓冲液混匀后，重新测定，其中基质设定为01（MATRIX 01）。 3、不同厂家孵育器和读数仪的使用方法可能有所不同，应按照产品使用说明的规定进行操作。   黄曲霉毒素B1的测定 六、结果表述 试样中黄曲霉毒素B1含量由读数仪自动计算并显示，单位为微克每千克（µg/kg）。 重复性：在同一实验室，由同一操作者使用相同仪器，按相同的测定方法，对同一被测试对象进行相互独立测试获得的两次独立测试结果的绝对差值大于其算术平均值20％的情况不超过5％。 黄曲霉毒素B1的测定