药物质量控制中现代分析方法的进展.pptxVIP

会计学;第一节 毛细管电泳分析法; 2、 HPCE的优点： (1) 毛细管中心与外界的距离很短，电泳产生的焦耳热很快被散去，有效防止电泳条带的扩散。 (2) 分析速度快、分离效率高 (3) 电极液用量少，不破坏生物样品，检测灵敏度高，用激光诱导荧光检测器灵敏度可达10-19g (4) 结构简单，操作方便，自动化程度高。;二、毛细管电泳仪;三、主要分离模式 1、毛细管区带电泳 主要用于离子状态存在的样品 （1）分离原理 几个基本概念： 偶电层 (Electric Double Layer，简称EDL) 电渗流：在高电压下，由于液固界面的双电层的存在，组成扩散层的阳离子向负极移动，导致毛细管中的溶液整体向负极移动。这种现象称为电渗流，用EOF表示,其速度表示为? eo表示。 电泳淌度：溶质在给定缓冲溶液中，单位时间在单位电场下移动的距离。用?ep表示，其速度用?ep表示。 ;表观淌度 μap：实际测得的电泳有效淌度和电渗流淌度的矢量和 μap= μef+ μEOF 表观迁移速度：离子在实际分离过程中的迁移速度 νap=μap ? E ;2、胶束电动毛细管色谱（MECC） 主要用于电中性物质的分离 分离原理：在缓冲溶液中加入离子型表面活性剂，形成胶束，被分离的物质的水和胶束两相分配，各溶质因分配系数差异而被分离;3、毛细管凝胶电泳（CGE） 是毛细管自由溶液区带电泳派生出的一种电泳方式 ，用多孔性的凝胶或其它筛分剂作介质，网状结构，按分子的大小分离。主要用于分析蛋白质、DNA等生物大分子。 ;4、毛细管等速电泳 5、毛细管等点聚焦电泳 6、毛细管电色谱（CEC) CE与HPLC的有机结合。CEC可看成是CZE的空毛细管被色谱固定相填充、涂布或键和的结果，在毛细管两端加高压直流电压，以电渗流代替高压泵推动流动相。 ;第二节 质谱（Mass Spectrum, MS）  ;第二节 超高效液相色谱及其应用;二、理论基础;首先颗粒度越小柱效越高；其次每个颗粒度尺寸有自己的最佳柱效的流速；最后，更小的颗粒度使最高柱效点向更高流速（线速度）方向移动，而且有更宽的线速度范围。所以降低颗粒度不但提高柱效，同时也提高速度。使用更高的流速会受到色谱柱填料耐压及仪器耐压的限制。反之，如果不用到最佳流速，小颗粒度填料的高柱效就无法体现。另外，更高的柱效需要更小的系统体积（死体积）、更快的检测速度等一系列条件的支持，否则小颗粒度填料的高柱效同样无法充分体现。; 要真正创建一个全新的分离科学领域 －UPLC，必须解决以下问题： 1）要解决小颗粒填料的耐压问题，第二要解决小颗粒填料的装填问题，包括颗粒度的分布以及色谱柱的结构。 2）高压溶剂输送单元（超过15000psi）。 3）完善的系统整体性设计，降低整个系统的体积，特别是死体积。并解决超高压下的耐压及渗漏问题。 4） 快速自动进样器，降低进样的交叉污染。 5）高速检测器；优化流动池以解决高速检测及扩散问题。 6）系统控制及数据管理，解决高速数据的采集、仪器的控制问题。 ;三、UPLC技术与特点 （1）新型色谱填料及装填技术;（2）超高压液相色谱泵 （3）自动进样器;（4）高速检测器;四、UPLC的特点;;使用1.7μm颗粒度的填料增加灵敏度;示例：;第三节 手性HPLC技术与应用;二、拆分原理及特点;2. 手性流动相拆分法（CMP） ;3. 手性固定相拆分法（CSP）;CSP种类;CSP的特点;第四节 色谱-质谱联用技术;分子分离器连接 （主要用于填充柱）从气相色谱来的载气和样品离子经一小孔加速喷射入喷射腔中，小分子的载气由于扩散速度较快，被真空泵抽除，而被测物分子量大将在惯性作用下继续直线运动而进入捕捉器。 直接连接法（主要用于毛细管柱）在色谱柱和离子源之间用长约50cm，内径0.5mm的不锈钢毛细管连接，色谱流出物经过毛细管全部进入离子源，这种接口技术样品利用率高。 开口分流连接该接口是放空一部分色谱流出物，让另一部分进入质谱仪，通过不断流入清洗氦气，将多余流出物带走。此法样品利用率低。;二、液相色谱-质谱联用(LC-MS);电喷雾电离源（ESI);第31页/共36页;大气压化学电离源(APCI);APCI和ESI的不同点;三、定性与定量的方法;2、选择性离子监控（SIM）：selected?ions?monitoring 在确定被分析物的质谱后，选择其中强度大、特征性强的离子，让质谱只检测这些离子。用保留时间为横坐标，记录一个或若干个特征离子碎片的强度所构成的质量碎片图谱。 在SIM中不是采集完整的质谱，而是不断记