(4.1.1)--葡萄球菌属鉴定.pptVIP

葡萄球菌属鉴定 任务目标 知识目标：掌握葡萄球菌属的生物学性状和微生物学检验； 熟悉葡萄球菌属细菌的致病性和临床意义。 能力目标：能进行葡萄球菌检验鉴定；能进行葡萄球菌属 与其他病原性球菌属、种之间的鉴别试验。 素质目标：遵循无菌操作，具有严肃认真、一丝不苟的工作作风。 需氧和兼性厌氧球菌鉴定 多数为条件致病菌 致病菌通常引起化脓性感染，故又称化脓性球菌 主要包括葡萄球菌属、链球菌属、肠球菌属、奈瑟菌属 将一脓汁标本接种与血琼脂平板，经35℃培养18~24小时，平板出现中等大小、有ß溶血、光滑、湿润的菌落，取菌落做革兰染色，镜检发现G+球菌，呈葡萄状排列。该菌在高盐平板上可生长。 案例引入 1.请你分析下，该菌可能是什么菌？ 2.要鉴定此菌还应做哪些试验，并写出这些实验的原理，操作步骤。 学习本节后需回答 一群革兰阳性球菌，通常排列成不规则的葡萄串状 分类 葡萄球菌属目前有35个种、17个亚种 凝固酶 凝固酶阳性葡萄球菌 凝固酶阴性葡萄球菌（ CoNS ） 引起人类疾病的重要菌种有: 金黄色葡萄球菌 表皮葡萄球菌 头状葡萄球菌 人葡萄球菌 腐生葡萄球菌 分类 （一）实验准备 1.人员准备：着白大衣、帽、口罩、手套。 微生物检验 2.标本采集 根据感染的部位，采集不同的标本。 该属细菌广泛分布在人体皮肤和黏膜，采取时避免病灶周围正常菌群污染。 微生物检验 3.培养基与试剂准备 血琼脂平板、甘露醇发酵管，革兰染色液、3％H2O2，新鲜兔血浆(或人血浆)\ 新生霉素纸片等。 微生物检验 4.其他 显微镜、接种环、酒精灯等。 微生物检验 形态与染色 球形（单个、成双、短链、葡萄串样） 0.5~1.5μm 革兰染色阳性 无芽胞，无鞭毛 致病性葡萄球菌有荚膜 （二）标本直接检查 葡萄球菌革兰染色镜下形态 涂片检查发现有形态相似的革兰阳性球菌，则可初步报告“查见类似葡萄球菌属革兰阳性球菌”，并进一步进行分离和鉴定予以证实。 无菌体液如脑脊液和关节穿刺液可使用涂片、革兰染色后直接显微镜检查，查见细菌具有重要临床价值。 其他体液标本如同时伴有炎性细胞时则直接显微镜检查结果也具有参考价值。 （二）标本直接检查 金黄色葡萄球菌，脓液涂片 金黄色葡萄球菌，痰涂片，革兰染色 1.培养特性 需氧或兼性厌氧，营养要求不高最适生长35~37℃，pH7.4~7.6。 普通培养基上形成直径2~3mm不透明的圆形凸起菌落,耐盐（10%~15%） 色素 金黄色；白色；柠檬色 脂溶性色素 ß溶血(金葡菌) 完全透明溶血环 （三）分离培养与鉴定 直径6~8mn，金黄色或橙色，菌落周围出现或不出现透明溶血环 （三）分离培养与鉴定 金葡，ß溶血 腐葡, 24h，SBA 直径5~8mm，白色或柠檬色 溶葡, 24h，SBA 直径5~9mm，不透明，无色素或奶油色、黄色 表葡，24h，SBA 直径为5~6mm，某些产粘液菌株能粘附在琼脂平板表面，无色或白色 脓液、咽试纸、分泌物等 接种于血琼脂平板 有污染的标本如粪便等 应接种在选择平板上，如甘露醇高盐平板、哥伦比亚 多粘菌素 奈啶酸平板 血液标本则用肉汤增菌培养基 （三）分离培养与鉴定 触酶试验阳性 凝固酶试验 甘露醇分解试验 新生霉素敏感实验 API葡萄球菌鉴定试剂盒 葡萄球菌检验的其它方法 抗原检测 乳胶凝集试验测定SPA及荚膜抗原 核酸检测 针对耐热核酸酶nuc、16S rRNA可鉴定葡萄球菌，测定mecA可以快速检出MRSA 肠毒素检测 动物试验、免疫学试验、毒素基因测定等 Slidex葡萄球菌胶乳凝集试剂 原理：用人纤维蛋白原和单克隆抗体致敏的蓝色乳胶颗粒,与S.aureus特殊表面结构上的群特异性抗原相结合，可同时检测凝集因子、蛋 白A 从混有杂菌的标本中分离葡萄球菌的首选培养基是： 巧克力琼脂培养基 EMB培养基 卵黄双抗培养基 高盐甘露醇培养基 A B C D 提交 关于葡萄菌生物学性状的叙述，下列不正确的是： 触酶阳性 营养要求不高 在高盐甘露醇平板上生长受抑制 某些菌种在血平板上形成透明溶血环 A B C D 提交 判定金黄色葡萄球菌的主要试验是： 甘露醇发酵 血浆凝固酶试验 明胶液化 触酶试验 A B C D 提交 金黄色葡萄球菌在液体培养基中的生长现象？ 均匀混浊 沉淀生长 菌膜生长 均匀混浊生长并有胶冻状凝块 A B C D 提交 萄球菌A蛋白（SPA） 绝大多数金葡菌细胞壁的表面蛋白 与IgG的Fc段发生非特异性结合后，Fab段仍可与特异性抗原结合 为免疫学及实验室诊断试剂（协同凝集试验） 抗原构造 在无