《食品微生物学检验》课件 8 大肠埃希氏菌O157：H7NM检验.ppt

1 范围 本标准规定了食品中大肠埃希氏菌O157: H7/NM( Escherichia coli O157: H7/NM)的检验方法。 本标准适用于食品中大肠埃希氏菌O157: H7/NM的检验。 2 设备和材料 2.1~2.10 略 2. 11 长波紫外光灯: 365nm,功率≤6W。 2. 12 微量离心管: 1. 5mL或2. 0mL。 2. 13 磁板、磁板架、样品混合器。 2. 14 微生物鉴定系统 * C 3 培养基和试剂 3. 1 改良EC肉汤(mEC+n):见A. 1。 3. 2 改良山梨醇麦康凯琼脂( CT-SMAC):见A. 2。 3. 3 三糖铁琼脂( TS I):见A. 3。 3. 6 月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤-MUG(MUG-LST):见A. 6。 3. 10 亚碲酸钾( AR级)。 3. 11 头孢克肟( Ce f i x ime)。 3. 12 大肠埃希氏菌O157显色培养基。 3. 13 大肠埃希氏菌O157和H7诊断血清或O157乳胶凝集试剂。 3. 14 鉴定试剂盒。 3. 15 抗E . coli O157免疫磁珠大肠埃希氏菌O157显色培养基。 * C 3.1 改良EC 肉汤（mEC+n) :见 A. 1。 ——用于O157选择性增菌 主要成分解析： 3?号胆盐 抑杂菌 乳糖??????????????? 产酸产气 新生霉素钠盐溶液 抑杂菌 3.2 改良山梨醇麦康凯（CT-SMAC)琼脂：见 A. 2。 ——依据必威体育精装版标准制作，主要用于食品和食物中毒样品中大肠埃希氏菌O157?:?H7?和O157?:?NM?的检验?，分离培养用，36?℃?士1?℃?培养18h?一24h?。??? 主要成分解析： 山梨醇?????????????????????阴性或迟发酵 3?号胆盐?????????????????抑杂菌 ? 中性红????????????????????显色剂 6.8～8.0 红~黄~橙 结晶紫????????????????????抑杂菌 * C 典型菌落为不发酵山梨醇（其他大肠杆菌为阳性）的圆形、光滑、较小，中心呈现较暗的原色小S菌落；发酵山梨醇的菌落为红色；E.coli O157:H7和O157:H7/NM为阴性/迟缓 3.10-A. 2.2 碲 3.11-A. 2.3 加到3.2中，抑制杂菌。 有效储藏期：-20 ℃ 一年； 2 ℃--8 ℃，14d。 * C 3.3 三糖铁琼脂（TSI）见 A. 3。 成分： 葡萄糖：乳糖：蔗糖＝1：10：10； 酚红:pH6.8--8.4 (黄-红)； 分解含硫氨基酸产生硫化氢和铁盐（硫酸亚铁铵）形成黑色； 制备成柱状斜面 功能： 判断分解三种糖的能力；是否产生硫化氢。 E. Coli O157 H7在TSI?琼脂中，分解葡萄糖和乳糖，典型菌株为斜面与底层均呈阳性反应呈黄色，产气或不产气，不产生硫化氢（H2S?）； * C 3.4 营养琼脂 A. 4 和 3.5 半固体琼脂A.5 略 3.6 (LST－MUG): A.6 (-) LST－MUG含4-甲基伞形酮-β-D-葡萄糖醛酸苷（MUG?) 本菌不含活性β-D-葡萄糖醛酸苷酶 即(-) （阴离子表面活性剂，主要作用是抑制G+菌 ） 乳糖 ＋ 在CT-SMAC?和改良CHROMagar?O157?显色琼脂平板上挑取5?-10?个典型或可疑菌落，分别接种TSI?琼脂(三糖铁琼脂)，并接种MUG-LST 肉汤，36?℃?士1?℃?培养18h-24h?. 置MUG-LST?肉汤管于长波紫外灯下观察，无荧光产生者为O157菌阳性结果（其他E.Coli有葡萄糖醛酸苷酶－有荧光产生），有荧光产生者为O157菌阴性结果；对分解乳糖且无荧光的菌株，在营养琼脂平板上分纯，于36?℃?士1?℃?培养18h?一24h?，并进行后续鉴定，如必要时进行： * C 3.7 ： A.7 (-) 3.8 ： A.8 (-) * C 3.9 PBS –Tween 20 洗液 A.9； 3.10和 3.11 在前面。 3. 12