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京大戟毒性部位及其醋制前后成分变化研究 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：京大戟毒性部位及其醋制前后成分变化研究 1 文2：股权分置改革前后上市公司绩效变化研究 9 一、股权分置改革评价 9 二、上市公司绩效评价 10 （一）绩效评价指标的选择 10 （二）影响我国上市公司绩效指标的主成分分析 11 2.样本上市公司财务指标的描述性统计 12 2004均值 2005均值 2006均值 12 3. 我国上市公司绩效评价指标的主成分分析 13 第四步：列示出特征值和贡献度。 13 （三）构建公司绩效的综合得分函数 14 (四)、样本综合得分差值计算及其分析 14 参考文摘引言： 15 原创性声明（模板） 16 文章致谢（模板） 17 正文 京大戟毒性部位及其醋制前后成分变化研究 文1：京大戟毒性部位及其醋制前后成分变化研究 京大戟为大戟科植物大戟Euphorbia pekineis Rupr. （ER） 的干燥根，性味苦，寒；有毒；归肺、脾、肾经，具有泄水逐饮、消肿散结的功效，常用于水肿胀满、胸腹积水、痰饮积聚、气喘逆咳，二便不利等[1]。课题组前期研究表明，京大戟生品存在明显的胃肠道毒性及炎症刺激性作用[2]，有报道亦提出京大戟对多种细胞具有毒性作用[34]，故临床使用时常采用其醋制品，以减轻毒性反应。目前对于京大戟的研究集中在炮制解毒研究[25]及毒性二萜类成分的分离[610]，而对于其临床毒性表现与毒性成分之间的相关性及炮制解毒的机制研究较少。 水通道蛋白（AQPs）是一类具有特异孔道结构的跨膜蛋白，能够介导水分子和甘油分子的通透，迄今共发现13个亚型（AQP0～AQP12），水通道蛋白在胃肠道中有大量的表达，对于维持胃肠道水液平衡具有重要作用[11]。人体的结肠组织每天吸收～2 L的水液，对于粪便的形成发挥着重要作用，在结肠组织中表达的蛋白有AQP1，AQP3，AQP4等。研究发现，增加结肠中AQP3的表达能够导致腹泻的产生[1213]。因此，本实验在整体动物水平采用灌胃给药方式，在小鼠灌胃3 h后收集粪便，测量粪便含水量；并测定小鼠十二指肠、空肠、回肠、结肠含水量，考察京大戟各部位对肠道水液代谢干扰作用的强弱；同时在细胞水平以IEC6细胞为研究对象，比较不同极性部位对IEC6细胞的增殖抑制作用，在分子水平采用RTPCR法测定结肠中AQP1，AQP3的mRNA表达水平，考察不同极性部位的毒性。得到最强毒性部位，并进行系统分离，得到毒性成分，再采用MTT法测定各成分对IEC6细胞的增殖抑制作用，验证其毒性；以液质联用的方法分析炮制前后最强毒性部位成分变化，最终揭示京大戟肠道毒性的物质基础及毒性作用机制，初步阐明炮制解毒的机制。 1材料 药材和试剂 京大戟购自河北安国药材市场，经江苏省食品药品检验所胡皓彬主任药师鉴定为大戟科植物大戟E. pekineis的干燥根。 mL 96孔半裙边PCR板（赛业生物科技，DPDPP022C1）；羧甲基纤维素钠（国药集团化学试剂有限公司）；胎牛血清（美国WISENT 公司）；RPMI 1640培养液（美国Hyclone公司）；青链霉素混合液（无锡海硕生物有限公司）；生理盐水（南京小营药业集团）；PBS缓冲液（Thermo公司）；石油醚（南京化学试剂有限公司）；二氯甲烷（南京化学试剂有限公司）；乙酸乙酯（南京化学试剂有限公司）；二甲亚枫（南京化学试剂有限公司）；其余试剂均为分析纯 。 仪器 SpringS15i超纯水发生器；KQ500DE型医用数控超声清洗器；Rotavapor R210旋转蒸发仪（BUCHI）；HH2K4二列四孔智能水浴锅（南京科尔仪器设备有限公司）；BP211D电子天平（德国Sartorius公司）；Spectra Max 190酶标仪（美国AD公司）；德国bruker Avance AV500/300核磁共振仪（TMS为内标）； 7500 Real Time PCR System（ABI）；HPLCMS/MS 液质联用仪 （Triple TOFTM 5600， AB SCIEX， CA） 细胞株 大鼠小肠隐窝上皮细胞IEC6（购自ATCC） 动物 ICR小鼠，雄性，体重25～27 g，由昭衍新药研究中心有限公司提供，许可证号SCXK（苏） 2方法 各部位的制备 称取京大戟药材 kg，加8倍量95%乙醇回流提取3次，每次2 h，合并提取液，减压回收溶剂，干燥得浸膏 kg。浸膏加水（1∶8）混悬后依次用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯萃取，并回收有机溶剂，最终得到石油醚部位 g；二氯甲烷部位 g；乙酸乙酯部位 g。 分组及给药 取ICR小鼠54只，