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检验医学专业实验III 临床生物化学检验部分 分光光度法测量 【理论依据】朗伯—比耳定律:当溶液中的物质在光的照射和激发下，产生了对光吸收的效应。但物质对光的吸收是有选择性的，各种不同的物质都有其各自的吸收光谱。所以根据定律，当一束单色光通过一定浓度范围的稀 有色溶液时，溶液对光的吸收程度A与溶液的浓度c(g/l)或液层厚度b(cm)成正比。其定律表达式A=abc (a是比例系数)。当c的单位为mol/l时，比例系数用ε表示，则A=εbc称为摩尔吸光系数。其单位为L/(mol*cm)。它是有色物质在一定波长下的特征常数。 分光光度计性能检查 ?波长检查:根据溴甲酚绿在610nm有最大吸收峰，检测722分光光度计的波长测定是否准确。 方法:580nm~630nm，每5nm测定一次溴甲酚绿(BCG)的吸光度，记录数据。 ?线性检查:根据朗伯比尔定律，溶液吸光度与溶液的浓度成正比。用一种有色物质配成不同浓度，在一定波长及一定浓度范围内确知其服从比尔定律，检查仪器本身是否能够如实的反映有色物质的浓度变化。 一、双缩脲法测定血清总蛋白 【原理】:血清中蛋白质的肽键在碱性溶液中能与2价铜离子作用生成稳定的紫红色化合物。此反应和两个尿素分子缩合后生成的双缩脲在碱性溶液中与铜离子形成紫红色的反映相似，故称之为双缩脲反应。这种紫红色络合物在540nm处有明显吸收峰，其吸光度与血清蛋白含量在一定范围内成正比，经与同样处理的蛋白质标准液比较，即可求得蛋白质含量。 双缩脲试剂中，酒石酸钾钠的作用:结合Cu2+，防止其在碱性条件下形成CuO沉淀。KI的作用:防止碱性酒石酸铜自动还原并防止Cu2O的离析。 【参考范围】健康成人:走动后为64~83g/L，静卧时为60~78g/L 【临床意义】 浓度增高见于:血浆浓缩(如急性脱水、外伤性休克、慢性肾上腺皮质功能减退) 、蛋白质合成增加(如多发性骨髓瘤) 浓度减低见于:血浆稀释(静注过多低渗溶液、水钠潴留)、营养不良或消耗增加(长期低蛋白饮食或慢性肠道疾病;长期患消耗性疾病)、蛋白质合成障碍(肝功能严重受损、此事宜清蛋白减低最为显著)、蛋白质丢失(严重烧伤、大出血、肾病综合征、溃疡性结肠炎)。 二、溴甲酚绿法测定血清清蛋白 【原理】:溴甲酚绿(BCG)在pH4.2的环境中，在有非离子去污剂存在时，可与清蛋白(Alb)结合形成蓝绿色复合物，在波长630nm处有吸收峰，其颜色深浅在一定范围内与清蛋白含量呈正比，与同样处理的清蛋白标准液比较，可求得血清中清蛋白的含量。 非离子去垢剂(Brij-35)的作用:提高蛋白质与染料的结合力及溶解度，提高呈色稳定性。 problems, in order to immediately dry and dry dry determination, leave no stone unturned, down-to-earth to do a good job security and peace, stability, and strive to realize the mass a sense of security and satisfaction. Staring at the iron Lattice lattice every Duan lattice. The public security organs Service Development and protect the livelihood of the people, the most direct service is to create a good public security environment, let people have a sense of security, let investors to worry. If a burglary can prevent cases of multiple masses safety feeling low, the masses iron, means that our work dereliction of duty. Therefore, to enhance the people a sense of security and satisfaction, so that iron more and less, is our biggest goal. As long as we earnestly to press incidence, enhance peoples sense of security and satisfaction as the starting point and the foothold, wi