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PAGE PAGE 3 高碘酸氧化和 Smith 降解 原理：高碘酸氧化和 Smith 降解 高碘酸可选择性断裂糖分子中的邻二羟基或邻三羟基处,生成相应的多糖醛,甲醛或甲酸.反应定量进行,每开裂 1 个C—C 键消耗 1 分子高碘酸.通过测定高碘酸的消耗量及甲酸的释放量,可以判断糖苷键的位置,直链多糖的聚合度,分支多糖的分支数等.Smith 降解是将高碘酸氧化产物还原后酸水解,再鉴定水解产物,从而推断糖苷键的位置与分支点等.以葡萄糖为例,以 1—2 或 1 —4 位键合的糖基经高碘酸氧化,平均每个糖基消耗 1 分子高碘酸,且无甲酸释放;1—3 位键合的糖基不被高碘酸氧化;1—6 位键合的糖基或非还原末端糖基经高碘酸氧化,消耗 2 分子高碘酸同时释放 1 分子甲酸. 准备物品： 容量瓶（25ml * 2，50ml * 2；茶色为好）、锡纸、碱式滴定管、定量滤纸； 高碘酸钠、乙二醇、溴甲酚(红)紫指示剂、0.005N NaOH(由 0.1N NaOH 稀释 20 倍制得， 使用前用邻苯二甲酸氢钾标定)、NaBH4 或 KBH4、50% HAc、1M H2SO4、BaCO3、乙醇。 实验步骤： 准确配置 30mM NaIO4 50ml （320.8mg NaIO4，定容至 50ml），用锡纸包好避光，取 0.1ml 稀释至 25ml，223nm 处测定吸光值大于 0.6 方可使用。（注：此溶液必须现用现配。） 准确称取糖样 50mg（记录下准确质量），用少量水溶解于 50ml 容量瓶中，然后加入 30 mM NaIO4 25ml，蒸馏水定容，使 NaIO4 终浓度为 15mM。用锡纸包好避光，放置在低温暗处反应，间隔时间(0、6、12、24、36、48、60……小时)取样 0.1ml，用蒸馏水稀释 250 倍， 以蒸馏水作空白对照，在 223nm 波长处测光密度值，直到光密度值恒定为止。 同时将剩余的30mM NaIO4 稀释为 15mM，与反应样品同样放置作为对照，待反应结束时取出 0.1ml，稀释250 倍后，用蒸馏水按不同比例稀释，每浓度三个重复，测定223nm 处的 蒸馏水（ml） 5 4 3 2 1 0 NaIO4 溶液（ml） 0 1 2 3 4 5 光密度值，以 OD 值为纵坐标，NaIO 光密度值，以 OD 值为纵坐标，NaIO4 浓度为横坐标，制作标准曲线。 NaIO4 浓 度 （Mm） 0 3 6 9 12 15 浓度-反应后高碘酸浓度)*反应体积 取2ml 上述氧化液，加1 滴溴甲酚(红)紫作指示剂，用0.005N NaOH 溶液滴定，计算得甲酸生成量。甲酸生成量（mmol）=（NaOH 的准确浓度*滴定用的体积/2ml）*反应体积 加乙二醇终止高碘酸氧化反应。流水及蒸馏水各透析 24 小时。浓缩至 10ml，加入 KBH4 70mg 还原过夜。用 50% 乙酸中和至 pH 为 6 7，流水及蒸馏水各透析 24 小时。取 1/3 干燥后做完全酸水解和 GC 分析，剩余部分进行 Smith 降解。 （2）加入等体积的 1M H2SO4，25℃水解 40 小时，BaCO3 中和至 pH 为 6，用定量滤纸过滤，滤液用蒸馏水透析 8 小时，袋外部分干燥做 GC 分析，滤液再用流水蒸馏水各透析 24 小时， 袋内部分水浴浓缩到适当体积，加乙醇醇析，离心，上清及沉淀部分干燥后分别做完全酸水解和GC 分析。 高碘酸氧化、Smith 降解 实验原理： 高碘酸氧化和 Smith 降解： 高碘酸可选择性断裂糖分子中的邻二羟基或邻三羟基处,生成相应的多糖醛,甲醛或甲酸.反应定量 进行,每开裂 1 个C—C 键消耗 1 分子高碘酸.通过测定高碘酸的消耗量及甲酸的释放量,可以判断糖苷键的位置,直链多糖的聚合度,分支多糖的分支数等.Smith 降解是将高碘酸氧化产物还原后酸水解,再鉴定水解产物,从而推断糖苷键的位置与分支点等.以葡萄糖为例,以 1—2 或 1 —4 位键合的糖基经高碘酸氧化,平均每个糖基消耗 1 分子高碘酸,且无甲酸释放;1—3 位键合的糖基不被高碘酸氧化;1—6 位键合的糖基或非还原末端糖基经高碘酸氧化,消耗 2 分子高碘酸同时释放 1 分子甲酸.。 高碘酸氧化是一种选择性的氧化反应，它只能作用于多糖分子中连二羟基或连三羟基处。当连二羟基的 C-C 键被氧化断开后，产生相应的醛；当连三羟基的 C-C 键被氧化断开后，产生甲酸及相应的醛。此反应定量进行，每断开 1molC-C 键，消耗 1mol 高碘酸，每生成 1 mol 甲酸对应消耗2mol 高碘酸。因此，通过测定高碘酸消耗量及甲酸生成量，便可以判断糖苷键的位置、直链多糖的聚合度及支链多糖的分支数目等。 高碘酸氧化产物经硼氢化钾还原，得到的多糖醇用稀酸在温和