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2100生物分析仪检测 库存物料 目录 01 异常分析 · 连接异常 · 峰图异常 重新 实验原理 检测原理:Agilent 2100 Bioanalyzer是基于芯片实验室技术的核酸分析系统，通过微流体技术对样品进行分离。当给芯片加入电压时，样品便在芯片上的显微蚀刻管道中进行毛细管电泳，在样品移动的过程中，不同RNA片段根据其大小的不同被分离。 芯片形象图 计算原理： 峰面积计算:荧光度与迁移时间决定 浓度:RNA Area/浓度=定值 28S/18S:峰面积比 RIN值： 标准品Ladder图 共同参与计算 发生错误时将对应项后方参数修正为1 修正参数为0 芯片实图 库存物料 项目及参数 RNA 6000 Nano总RNA分析（4℃） RNA 6000 Pico总RNA分析（4℃） 定量范围 25-500ng/ul 50-5000pg/ul 分析运行时间 30min 30min 芯片数量 25块 25块 每张芯片检测样品数量 12 11 样品上样量 1ul 1ul 试剂盒检测样本量 300例/试剂盒 275例/试剂盒 Ladder量（保存温度） 35ul（-80℃） 10ul（-80℃） Ladder浓度 150ng/ul 10ng/ul（需稀释10倍使用） 试剂盒属性 nano试剂盒 pico试剂盒 · 28S/18S值为2.0-2.2 · RIN值为10 · 浓度依据建库要求而定 RNA无降解无污染的标准参数 参数标准 不合格RNA举例 · 28S/18S=1.1 · RIN值=2.3 · 浓度=745ng/ul 降解、污染 库存物料 01 准备工作 02 芯片制备 03 04 样品检测 上机检测 编辑报告 准备工作 芯片制备 准备工作 芯片制备 编辑报告 上机检测 ① 平衡试剂30min ② 擦桌面及移液枪 ③ 探针清洗 ④ 制作点样明细 ⑤ 按点样明细顺序取出样品，在PCR仪中70℃变性2min，放入-20℃冰箱暂存 ⑥ 胶:染料=65:1的比例配胶，混匀后13000RCF常温离心10min ① DEPC1清洗3min ② ZAP清洗5min ③ DEPC2清洗3min ④晾干10min ① 向芯片三个G孔中分别加入9ul胶 ② 将芯片放入注胶器中，压胶50S，松开弹簧夹直至注射器静止 ③ 向芯片样品孔和标准品中各加入5ul Maker (pico芯片向CS孔中加9ul CS) ④ 向每个样品孔中加入1ul样品，标准品孔中加入1ul Ladder ⑤ 将制备完成的芯片置于震荡仪中2200rpm震荡1min 上机检测 ① 将制备完成的芯片置于生物分析仪中 ② 根据样品浓度及类型选择程序 ③ 将点样明细上的样品信息粘贴至检测程序中 ① 导出样品检测信息（PDF胶图文件与Excel数据文件） ② 整理样品数据，截取样品胶图（将胶图命名为对应样品编号） ③ 将整理的数据粘贴于样品信息模板中，补充模板中的其他信息（检测人、 检 检测时间、提取方法、检测方法、样品类型、5S峰、基线等） ④ 将导入样品信息模板导入BMS系统中，在系统中交接后生成报告单号 ⑤ 将样品胶图所在的文件夹命名为系统中生成的报告单号,导入Filezilla软件中 ⑥ 编辑报告，核对其中的信息，确认无误后提交给审核人审核 库存物料 品质判断 建库类型 样本类型 检测结果 判定结果 Agilent 2100 总量 浓度 RIN值 28S:18S值 RNA_Seq（RNaseH） Total RNA(人、小鼠) m≥0.4μg c≥58ng/μL RIN≥7.0 28 S/18 S≥1.0 A类 0.2μg≤m0.4μg c≥58ng/μL RIN≥7.0 28 S/18 S≥1.0 B类 m≥0.2μg c≥58ng/μL RIN≥7.0 0.8≤28 S/18 S1.0 C类 m0.2μg C58ng/μL RIN7.0 28 S/18 S0.8 D类 RNA_Seq（OligodT） 转录组 OligodT Total RNA(人、小鼠) m≥2μg c≥59ng/μL RIN≥7.0 28 S/18 S≥1.0 A类 1≤m2μg c≥59ng/μL RIN≥7.0 28 S/18 S≥1.0 B类 0.8≤m1μg 47ng/μL≤c59ng/μL RIN≥7.0 0.8≤28 S/18 S1.0 C类 m0.8μg c47ng/μL RIN7.0 28 S/18 S0.8 D类 Total RNA(昆虫) m≥5μg c≥147ng/μL A类 2.5μg≤m5μg c≥147ng/μL B类 1.5μg≤m2.5μg 88ng/μL≤c147ng/μL C类 m1.5μg c88μg D类 Total RNA(其它真核生物) m≥