实验六食品中亚硝酸盐含量测定.docxVIP

实验 食品中亚硝酸盐含量测定 （格里斯试剂比色法） （—）目的 熟悉食品中亚硝酸盐的卫生标准，掌握食品中亚硝酸盐含量测定的基本方法。 （二）原理 样品经沉淀蛋白质、除去脂肪后，在弱酸性条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后，在与 N－1－萘基乙二胺偶合形成紫红色染料后，与标准比较定量。 （三）试剂 实验用水为蒸馏水，试剂不加说明者，均为分析纯试剂。 氯化胺缓冲液 lL 容量瓶中加入 500ml 水，准确加人盐酸，振荡混匀，准确加入 50ml 氢氧化铵，用水稀释至刻度。必要时用稀盐酸和稀氢氧化铵调试至～。 4 2／L 硫酸锌溶液 称取 120g 硫酸锌（ZnSO ·7H 0） 4 2 1000ml。 20g／L 氢氧化钠溶液 称取 20g 氢氧化钠用水溶解，稀释至 1L。 对氨基苯磺酸溶液 称取 10g 对氨基苯磺酸，溶于 700ml 水和 300ml 冰乙酸中，置棕色瓶中混匀，室温保存。 0.1％N－1－萘基乙二胺溶液 称取 N－1－荼基乙二胺，加 60％乙酸溶解并稀释至 100ml，混匀后，置棕色瓶中，在冰箱中保存，一周内稳定。 显色剂 临用前将％N－1－萘基乙二胺溶液和对氨基苯磺酸溶液等体积混合。 亚硝酸钠标准溶液 准确称取于硅胶干燥器中干燥 24h 的亚硝酸钠，加水溶解移入 500ml 容量瓶中，加 100ml 氯化胺缓冲液，加水稀释至刻度，混匀， 在 4℃避光保存。此溶液每毫升相当于 500ug 的亚硝酸钠。 亚硝酸钠标准使用液 临用前，吸取亚硝酸钠标淮溶液，置于 100ml 容 量瓶中，加水稀释至刻度，此溶液每毫升相当于亚硝酸钠。 （四）仪器 小型粉碎机 分光光度计 （五）操作方法 样品处理 称取约 10.00g（粮食取 5g）经绞碎混匀样品，置于打碎机中， 加 70ml 水和 12m1 2％氢氧化钠溶液，混匀，用 2％氢氧化钠溶液调样品至 pH8， 定量转移至 200ml 容量瓶中加 10ml 硫酸锌溶液，混匀，如不产生白色沉淀，再补加 2～5m1 氢氧化钠，混匀。置 60℃水浴中加热 10min，取出后冷至室温， 加水至刻度，混匀。放置，用滤纸过滤，弃去初滤液 20m1，收集滤液备用。 亚硝酸盐标准曲线的制备 吸取 0，，，，亚硝酸钠标准使用液（相当于 0， 5，10，15，20，25ug 亚硝酸钠），分别置于 25ml 带塞比色管中。于标准管中分别加入 氯化胺缓冲液，加 2.5m1 60％乙酸后立即加入显色剂，加水至刻度， 混匀，在暗处静置 25min，用 1cm 比色杯（灵敏度低时可换 2cm 比色杯），以零管调零点，于波长 550nm 处测吸光度，绘制标准曲线。 低含量样品以制备低含量标准曲线计算，标准系列为：吸取0，，，亚硝酸钠标准使用液（分别相当于 0，2，4，6，8，10ug 亚硝酸钠）。 样品测定：吸取上述滤液（样品处理滤液）于25ml 带塞比色管中，其它操作同上。 （六）结果计算