单抗制备-细胞融合筛选过程中遇到的问题及对策.pdfVIP

单抗制备 -细胞融合筛选过程中遇到的问题及对策 1，融合率低，阳性孔少 ①免疫的问题。由于免疫原性不强或者免疫途径不当造成免疫弱，效价低。 ②融合过程中温度、时间、 PEG分子量，作用时间等。 ③脾细胞是否取出了足够多的细胞，有无组织碎片干扰。 ④融合前骨髓瘤细胞生长状态是否完好，细胞是否浑圆，透亮，成对数生长。 2 ，单抗亲和力整体低 ①免疫的问题。免疫途径不当或者免疫原问题。 ②融合细胞筛选过程出现遗漏， 筛选方法不当或检测方法不当， 造成没有筛到高 亲和力的融合细胞。 ③由于亚克隆细胞生长环境不合适，导致融合细胞染色体丢失，分泌特性改变， 亲和力从高变低，这时就需要 及时更换培养液，当细胞增长到一定密度的时候， 培养基就开始变颜色， 影响融合细胞的生长， 造成染色体丢失； 控制好细胞的密 度，密度过大使新加入的培养基不至于很快被消耗， 影响融合细胞的生长， 造成 染色体丢失； 不要 过于频繁操作细胞， 当细胞生长密度不是很大的时候， 不要频 繁操作，否则细胞容易出现死亡或者生长形态发生明显变化。 操作细致，防止细胞被支原体等微生物污染。 3，抗体亲和力从高变低 ①没有及时更换培养液，当细胞增长到一定密度的时候，培养基就开始变颜色， 影响融合细胞的生长，造成染色体丢失或者性状改变。 ②控制好细胞的密度， 密度过大使新加入的培养基不至于很快被消耗， 影响融合 细胞的生长，造成染色体丢失或者性状改变。 ③过于 频繁操作细胞， 当细胞生长密度不是很大的时候， 不要频繁操作， 否则细 胞容易出现死亡或者生长形态发生明显变化。 ④细胞被支原体等微生物污染。 ⑤亚克隆次数超过 5 次，导致细胞生长环境经常被改变， 弱的阳性杂交瘤细胞 染 色体丢失或者性状改变。