布病病原学及血清学咸阳.pptVIP

布病病原学及实验室诊断; 布氏菌概述; 1887年，英国军医Bruce从马耳他岛死于“马耳他热”的士兵脾脏中首次分离到羊种布氏菌；1897年丹麦学者和1914年美国学者又分别从流产母牛的羊水和猪流产胎儿中分别分离到牛种布氏菌和猪种布氏菌。 最近半个世纪以来，在布病诊断、免疫、预防和治疗等方面都有较深的发展，1953、1956和1966年又分别发现了绵羊附睾种布氏菌、沙林鼠种布氏菌和犬种布氏菌。;1994年，Foster在英国从海洋哺乳动物体内分离到布鲁氏菌，后来在地中海、南美、澳洲等世界许多地方的海洋哺乳动物体内分离到布鲁氏菌，表明其分布是世界性的。与其它布鲁氏菌种一样，也能引起动物流产，并可感染人。根据其表型和分子生物学特性分成2个种，鲸种布鲁氏菌(B.ceti)和鳍种布鲁氏菌(B.pinnipedialis) ;2008年，德国和捷克科学家报道了一个新布鲁氏菌种-田鼠种布鲁氏菌(B.microti)。 2010年德国人Holger C.Scholz等从具有临床症状的乳房移植感染的71岁病人身上分离到一株布氏菌，鉴定结果为一个布鲁氏菌新种，为湖浪种(B.inopinata)。目前尚未得到布鲁氏菌分类小组委员会承认。 ;1994年分离出的2个海洋种和2008年分离的田鼠种已列入分类，即目前为9个生物种，22个生物型。; 2013年，我省分离出3株布鲁氏菌，2014年共分离出20株（绥德7、延川3、定边2、子长2、旬阳2、宝塔区延长宜川麟游各1株）；1991年以前流行优势种型为羊1、2型，1996年后则为羊1、3型 。 陕西省是以羊型菌为主，牛、犬种布鲁氏菌病的混合疫区，流行优势种随时间推移发生了变化。;形态和培养特征;9;布氏菌对物理、化学因子的抵抗力;不同环境中的抵抗能力; 从种上来说，羊种毒力最强，猪种和牛种次之，犬种的毒力很弱，几乎不引起人致病。 由于菌种毒力等因素的不同，患病后的临床表现也不完全一样。羊种布鲁氏菌患者中毒症状严重，多有典型的发烧、多汗、乏力、关节肿痛、肝脾及睾丸肿大等急性症状。;布病发病过程;布氏菌的实验室检验; 实验室要求： 布氏菌是高致病性病原微生物，从危害程度来说为第二类病原微生物。布氏菌的分离培养要在生物安全二级以上实验室中进行。 样品???集 培养分离 菌株鉴定 种型鉴定 ; 2.1.1 布氏菌培养检查材料： 人或动物的全血 动物流产胎儿（胎儿的肝脏、肺、胃内容物） 动物脏器、动物胎盘、关节液、阴道分泌物等 新鲜乳汁 ;2.1.2 双相血培养瓶;双相血培养瓶培养方法;县镇村组;20;21;布氏菌特异的油滴样菌落;布氏琼脂布鲁氏菌菌落;血平皿 布氏菌菌落;布氏菌革兰氏染色;3.1.4 布氏菌菌株鉴定;羊种布氏菌噬菌体裂解;PCR检测;血清学检验;3.2.2 布氏菌的血清学诊断方法;凝集试验：细菌、红细胞等颗粒性抗原与相应抗体结合后形成凝集团块，这一类反应称为凝集反应。;虎红玻片凝集实验;方法：在玻片上加0.03ml被检血清，然后加入虎红平板抗原0.03ml，充分混匀，5min之内观察结果。 结果判定：出现可见的凝集反应就判为阳性；否则就为阴性。;34;注意事项：;原理：布氏菌侵入机体后，就会刺激机体产生特异性抗体，其可与相应的抗原发生特异性结合，在电解质的作用下，就会形成肉眼可见的凝集反应，也就是用已知抗原查未知抗体。;试管凝集试验;0.2ml血清;比浊管的制备;结果判定： 根据各管中上层液体的清亮度记录凝集反应程度（滴度），特别是50%清亮度（++）对判定结果关系较大，一定要与比浊管对比判定。 ++++ 液体完全透明，菌体成伞状沉淀或块状颗粒状沉淀，呈100%凝集。 +++ 液体近于完全透明，菌体成伞状沉淀，呈75%凝集。 ++ 液体略微透明，菌体呈较薄伞状沉淀，呈50%凝集。 + 液体不透明，管底有很不明显的伞状沉淀，呈25%凝集。 — 液体不透明，无伞状沉淀。 效价以产生50%凝集的血清最高稀释倍数为受检血清的效价。 血清对照为清亮透明无沉淀，抗原对照为均匀浑浊，两种对照管成立，才可判定试验管，否则重做。 人的诊断标准：滴度1︰100及以上或病程一年以上者滴 度为1︰50及以上为阳性 ;41;注意事项;抗人球蛋白实验（Coomb’s）; 布氏菌感染后，约在15天出现不完全抗体，3个月左右达到高峰。可持续一年左右。该实验可作为早期和追溯诊断。 该试验特异性较强，尤其适用于诊断亚急性和慢性病人，所查抗体主要为IgG、IgA类。 一般不作为常规项目，在试管凝集试验为可疑，