超氧化物歧化酶(sod)活性的测定方法.pdf

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超氧化物歧化酶( SOD)活性的测定方法 一、试剂 1. 0.1mol/LHCl 2. 10mmol/LHCl 3. 0.1mol/LTris 标准溶液: 12.114g 三羟甲基氨基甲烷溶于蒸馏水,并定容至 1000ml. 4. 50mmol/LTris 缓冲溶液:50ml0.1mol/LTris 标准溶液中加入 0.1mol/LHCl19.9 ~22.0ml, 定容 至 100ml,PH为 8.20 。 5. 30mmol/L 邻苯三酚盐酸溶液: 3.7833g 邻苯三酚溶于 10mmol/LHCl中,并用 10mmol/LHCl定容 至 1000ml. 二、仪器 1. 紫外分光光度计 2. 酸度计 3. 恒温水浴锅 三、操作方法 1. 邻苯三酚自氧化速率测定 在试管中加入 4.5ml50mmol/LTris 缓冲溶液,于 25℃保温 20min, 加入 10~20ul30mmol/L 邻苯三 酚,立即计时并摇匀, 倾于比色杯内, 于 325nm下,每隔 1min 测吸光值一次, 空白以 10mmol/LHCl 代替邻苯三酚,要求自氧化速率控制在 0.070OD/min 左右。 2.SOD活性测定 将样液加入到 Tris 缓冲溶液中,其余步骤同自氧化速率测定方法。 活力单位定义:将一定条件下使每毫升反应液自氧化速率抑制 50%的酶量定义为一个单位 (u)。

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