微生物实验注意事项.pdf

百度文库 - 好好学习，天天向上 微生物实验注意事项 一、无菌操作要求 1.接种细菌时必须穿工作服、戴工作帽。 2.进行接种食品样品时，必须穿专用的工作服、帽及拖鞋，应放在无菌室缓冲间，工作前经 紫外线消毒后使用。 3.接种食品样品时，应在进无菌室前用肥皂洗手，然后用75％酒精棉球将手擦干净。 4.进行接种所用的吸管，平皿及培养基等必须经消毒灭菌，打开包装未使用完的器皿，不能 放置后再使用，金属用具应高压灭菌或用95%酒精点燃烧灼三次后使用。 5.从包装中取出吸管时，吸管尖部不能触及外露部位，使用吸管接种于试管或平皿时，吸管 尖不得触及试管或平皿边。 6.接种样品、转种细菌必须在酒精灯前操作，接种细菌或样品时，吸管从包装中取出后及打 开试管塞都要通过火焰消毒。 7.接种环和针在接种细菌前应经火焰烧灼全部金属丝，必要时还要烧到环和针与杆的连接处， 接种结核菌和烈性菌的接种环应在沸水中煮沸5min，再经火焰烧灼。 -1 百度文库 - 好好学习，天天向上 8.吸管吸取菌液或样品时，应用相应的橡皮头吸取，不得直接用口吸。 二、无菌间使用要求 1、无菌间通向外面的窗户应为双层玻璃，并要密封，不得随意打开，并设有与无菌间大小 相应的缓冲间及推拉门，另设有0.5-0.7平方米的小窗，以备进入无菌间后传递物品。 2、无菌间内应保持清洁，工作后用2%-3%煤酚皂溶液消毒，擦拭工作台面，不得存放与实 验无关的物品。 3、无菌间使用前后应将门关紧，打开紫外灯，如采用室内悬吊紫外灯消毒时，需30W紫外 灯，距离在1.0m处，照射时间不少于30min，使用紫外灯，应注意不得直接在紫外线下操 作，以免引起损伤，灯管每隔两周需用酒精棉球轻轻擦拭，除去上面灰尘和油垢，以减少 紫外线穿透的影响。 4、处理和接种食品标本时，进入无菌间操作，不得随意出入，如需要传递物品，可通过小 窗传递。 5、在无菌间内如需要安装空调时，则应有过滤装置。 三、消毒灭菌要求 -2 百度文库 - 好好学习，天天向上 微生物检测用的玻璃器皿、金属用具及培养基、被污染和接种的培养物等，必须经灭菌后 方能使用。 （一）干热和湿热高压蒸气锅灭菌方法 1、灭菌前准备 （1）所有需要灭菌的物品首先应清洗晾干，玻璃器皿如吸管、平皿用纸包装严密，如用金 属筒应将上面通气孔打开。 （2）装培养基的三角瓶塞，用纸包好，试管盖好盖，注射器须将管芯抽出，用纱布包好。 2、装放 （1）干热灭菌器：装放物品不可过挤，且不能接触箱的四壁。 （2）大型高压蒸气锅：：放置灭菌物品分别包扎好，直接放入消毒筒内，物品之间不能过 挤。 3、设备检查 -3 百度文库 - 好好学习，天天向上 （1）检查门的开关是否灵活，橡皮圈有无损坏，是否平整。 （2）检查压力表蒸气排尽时是否停留在零位，关好门和盖，通蒸气或加热后，观察是式高 压锅或立式压力蒸气灭菌器的使用应按下列步骤进行： ①手提式高压锅在主体内加入3L 清水，立式高压锅加水 16L （重复使用时应将水量补足， 水变混浊需更换）. ②手提式压力锅将顶盖上的排气管插入消毒桶内壁的方管中（无软管或软管锈蚀破裂的灭 菌器不得使用）。 ③盖好顶盖拧紧，勿使漏气；置灭菌器于火源上加热，立式压力锅通上电源，并打开顶盖 上的排气阀放了冷气（水沸腾后排气10-15min）。 ④关闭排气阀，使蒸气压上升到规定要求，并维持规定时间（按灭菌物品性质与有关情况 而定）。 ⑤达到规定时间后，对需干燥的物品，立即打开排气阀排出蒸气，待压力恢复到零时，自 然冷却至 60℃后开盖取物，如为液体物品，不要打开排气阀，而应立即将锅去除热源，待 自然冷却，压力恢复至零，温度降到60℃以下再开盖取物，以防突然减压液体剧烈沸腾或 容器爆破。 （3）卧式压力锅蒸气灭菌器的使用按下列步骤进行： -4 百度文库 - 好好学习，天天向上 ①关紧锅门，打开进气阀，将蒸气引入夹层进行预热，夹层内冷空气经阻气器自动排出。 ②夹层达到预定温度后，打开锅室进气阀，将蒸气引入锅室，锅室内冷空气经锅室阻气器 自动排出。 ③待锅室达到规定的压力与温度时，调节进气阀，使保持恒定至 ④自然或人工降温至 60℃再开门取物，不得使用快速排出蒸气法，以防突然降压，液体剧 烈沸腾或容器爆破。 ⑤使用自动程序控制式压力蒸