现代生物技术5.pptxVIP

第五章动物胚胎工程技术及体外受精 现代生物技术家畜育种领域繁殖生物技术分子生物技术胚胎工程技术 人工受精技术超数排卵和胚胎移植胚胎性别鉴定体外受精胚胎分割克隆技术第一节 胚胎工程技术胚胎移植胚胎融合胚胎分割胚胎的冷冻保存早期胚胎培养胚细胞核移植受精过程 ①分解放射冠的卵泡细胞 ②水解局部透明带 ③ 精子细胞核和部分胞质进入卵母细胞卵裂及胚泡形成（第一周）卵裂(cleavage) 受精卵由输卵管向子宫方向运行，并不断进行细胞分裂，受精卵早期的细胞分裂称卵裂；卵裂产生的子细胞呈球形，称卵裂球（blastomere）桑椹胚（morula） 受精后第3天，形成了12~16个卵裂球组成的实心胚，形似桑椹，称桑椹胚胚泡形成 受精后第4~6天桑椹胚细胞继续分裂，细胞间开始出现小腔隙，并逐渐汇合成一个大腔，桑椹胚转变为中空的泡状，称胚泡（blastocyst），胚泡由三部分组成： 胚泡极端滋养层滋养层内细胞群胚泡腔一、胚胎移植受精卵移植把一头雌性动物的早期胚胎从输卵管或子宫中冲洗出来，移植到另一头雌性动物的输卵管或子宫内，使之继续发育成新个体的技术供体提供胚胎的动物受体接受和孕育胚胎的动物胚胎移植的历史初始阶段1890-1900 W.Heape将安哥拉兔和荷兰兔的受精卵分别移植到比利时兔的输卵管内，分别获得仔兔2只1900-1950 主要由英美科学家在家兔、绵羊、山羊小家畜方面研究，成功率35%左右发展阶段1950-1970 日本首次在牛胚胎移植上成功，之后日、美采用非手术法移植成功，胚胎移植成功率达70-80%胚胎移植的历史实用化初始阶段 1970-1980 加美开始成立牛胚胎移植公司，1973年牛冻胚移植成功（英）实用化研究阶段 1982- 大规模胚胎移植、核移植、嵌合体、胚胎分割、性别鉴定、体外受精在英美日德广泛开展，克隆羊诞生1.胚胎移植的生理学基础成年母畜卵巢上存在数千到上万个卵泡，在外源激素作用下，每个发情期的卵泡发育和排卵数可达数十个每个发情周期生殖器官都有一个孕向发育早期胚胎处于游离状态胚胎发育不存在免疫问题胚胎发育到一定阶段会与子宫发生生理和组织联系胚胎的遗传性不受受体的影响2. 胚胎移植的基本原则胚胎移植前后所处的环境的同一性供体和受体在分类学上的相同属性动物生理上的一致性：受体和供体在发情时间上的同期性动物解剖位置上的一致性：空间环境的一致性胚胎的发育期限：必须处于周期黄体期内胚胎的质量：胚胎必须是正常的，并在处理过程中不受不良因素的影响3、胚胎移植供受体的选择与管理供体的超数排卵处理和配种受体的同期发情处理胚胎回收胚胎检查胚胎移植1）供受体的选择与管理供体的选择遗传价值：生产性能优秀的母畜健康状况:身体健康，营养水平中等以上的未孕动物繁殖性能：达到配种年龄以上繁殖机能正常的母畜受体的选择身体健康，身体状况中上的适繁未孕个体，无生殖道疾病和难产病史繁殖状况正常，有正常的发情周期母性良好：泌乳性能、护仔性能供、受的管理防疫、记录饲养管理等 2）同期发情（synchronization of eatrus）采用激素或类激素的药物处理，使这一群母畜在特定时间内集中发情和排卵即将母畜的黄体期延长或缩短，使母畜摆脱内、外孕激素对卵巢的控制，在同一时间内引起全部母畜的卵泡发育，从而达到同期发情的目的延长黄体期：孕激素 控制卵泡的生长发育和发情表现缩短黄体期：前列腺素 加速黄体退化，使卵巢提前摆脱体内孕激素的控制促进卵泡发育、排卵：促性腺激素 3）、超数排卵超排：以各种外源性促性腺激素诱发动物卵巢的许多卵泡发育并排出具有受精能力的卵子孕母马促性腺激素、促卵泡素、前列腺素、促排卵类药物、孕激素超数排卵处理的时期应选择在发情周期的后期，即黄体消退时期个体对超排处理的反应效果难以预测；产生不良的后果：胚胎死亡卵母细胞蛋白质合成过程发生改变生殖道机能产生影响羊同期发情——放栓供体超排处理供体配种4）胚胎回收利用冲胚液从供体的生殖道中冲洗出来，提供移植或其它胚胎工程用手术法非手术法移胚配种后3天的供卵巢供体羊胚胎收集5）胚胎检查胚胎早期发育胚胎质量评价：透明带的形态和完整性胚胎的发育与胚龄是否一致胚胎的形态与匀称性，胚内细胞大小的变化细胞质的结构及颜色，胚内是否出现空泡，细胞碎片，有无游离细胞如A级： 为优良胚胎，形态典型，卵裂球轮廓清晰，紧密充实，大小均一，细胞质致密，色调和分布均一6天收集的胚胎（未拣）二细胞至四细胞胚胎 6）胚胎的保存胚胎的降温：使胚胎停止发育，延长其体外生存时间体外培养：将胚胎置于体温条件下，在培养液中，使其继续发育胚胎冷冻：通过一定的处理程序，将胚胎降温冷冻后，保存于液氮中胚胎冷冻的原理胚胎冷冻实际是脱水的过程，冷冻保存的关键是设法减少细胞内冰晶对胚胎的损伤冷冻过程中，水分形成冰晶造成细胞机械损伤，同时，