12DNA重组技术的基本操作程序.pptxVIP

1. 2基因工程的基本操作程序编码区：非编码区1、原核细胞的基因结构非编码区非编码区编码区启动子终止子与RNA聚合酶结合位点能转录为mRNA，编码蛋白质原基核因细结胞构不能转录为mRNA，不能编码蛋白质启动子：位于基因的首端，是RNA聚合酶 识别和结合的部位，有了它才能驱动 基因转录出mRNA，最终获得蛋白质。功能终止子：位于基因尾端的一段特殊的DNA 片断，能终止mRNA的转录。非编码区2、真核细胞的基因结构编码区启动子终止子与RNA聚合酶结合位点内含子 外显子 非编码区：真核细胞基因结构外显子：能编码蛋白质的序列内含子：不能编码蛋白质的序列编码区非编码区3、原核细胞与真核细胞的基因结构比较原核细胞真核细胞不同点编码区是_____的编码区是间隔的、______的相同点都由能够编码蛋白质的_______ 和具有调控作用的_________组成的连续不连续编码区非编码区思考编码相同数目氨基酸的蛋白质，原核细胞与真核细胞基因结构一样长吗？原核生物的基因表达编码区非编码区非编码区终止子基因启动子转录RNA聚合酶mRNA翻译蛋白质真核生物的基因表达编码区非编码区非编码区基因终止子启动子转录RNA聚合酶mRNA前体剪接剪接有关的酶mRNA翻译蛋白质1.2 基因工程的基本操作程序1、目的基因的获取2、基因表达载体的构建3、将目的基因导入受体细胞4、目的基因的检测与鉴定一、目的基因的获取目的基因主要是编码蛋白质的基因1如：与生物抗性相关的基因、 与优良品质相关的基因、 与生物药物和保健品相关的基因、 与毒物降解相关的基因、 与工业用酶相关的基因、 具有调控作用的因子等。2获取目的基因的常用方法： 1、从基因文库中获取 2、利用PCR技术扩增 3、利用DNA合成仪用化学方法直接人工合成（一） 从基因文库中获取目的基因1. 基因文库的概念: 将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因。2. 基因文库的种类:基因组文库：含有一种生物的全部基因部分基因文库：只包含了一种生物的部分基因， 如：cDNA文库基因文库的构建方法① 基因组文库的构建提取某种生物的全部DNA用适当的限制酶 切割一定大小的DNA片段将DNA片段与载体 连接重组DNA导入受体菌 中储存基因组文库DNA聚合酶基因文库的构建方法② cDNA文库的构建-----反转录法： 提取某种生物的mRNAmRNA反转录酶单链DNA单链DNA双链cDNA片段双链DNA与载体连接重组DNA导入受体菌中储存cDNA文库思考？真核生物的基因用反转录法得到的cDNA与原基因相同吗？真核细胞的cDNA的获取编码区非编码区非编码区基因终止子启动子转录RNA聚合酶mRNA前体剪接剪接有关的酶mRNA反转录反转录酶不含非编码区和内含子单链DNA复制DNA聚合酶cDNA限制酶反转录与运载体 连接导入与运载体 连接导入cDNA文库与基因组DNA文库某生物体内全部DNA 某种生物某个时期的mRNAcDNA许多DNA片段受体菌群体受体菌群体基因组文库cDNA文库基因组文库与cDNA文库的比较文库类型cDNA文库基因组文库文库大小基因中启动子（具有启动作用的DNA片段）基因中内含子(位于编码蛋白质序列的非编码DNA片段）基因多少 物种间的基因交流小大有无无有某种生物的部分基因某种生物的全部基因可以部分基因可以概念：PCR全称为_______________，是一项在生物_____复制______________的核酸合成技术。 12原理：条件：3前提：（二）利用PCR技术扩增目的基因多聚酶链式反应体外特定DNA片段DNA双链复制模板DNA；四种脱氧核苷酸； 热稳定DNA聚合酶（Taq酶）； DNA引物一段已知目的基因的核苷酸序列PCR反应原理示意图：a.DNA变性（90℃-95℃）：双链DNA模板在热作用下，_____断裂，形成________氢键单链DNAb.退火（55℃-60℃）：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部__________。 双链DNAc.延伸（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下，合成与模板互补的__________。 DNA单链d.重复a.b.c步骤：每重复一次，目的基因增加___倍1PCR反应原理示意图：PCR技术的操作过程PCR反应体系中目的基因成指数(2n)形式扩增思考？1个DNA分子进行PCR扩增,循环4次，理论上至少需要几个引物？（24-1）×2=302×（2n-1）(n为循环次数)PCR技术扩增与DNA复制的比较DNA复制PCR技术场所原理条件解旋方式酶特点结果主要在细胞核内体外复制碱基互补配对原则碱基互补配对原则四种脱氧核苷酸、模板、酶、ATP四种脱氧核苷酸、模板、酶、引物解旋酶催化解旋DNA在高温下解旋细胞内的解旋酶、