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动物基因组DNA/RNA 提取及含量测定;目的要求 ;实验原理;在提取中为防止组织中广泛存在的核酸酶降解的作用,应在低温下进行,必要时加入抑制剂,如柠檬酸盐、氟化钠、砷酸盐等,皂土也可抑制DNA酶的活性,如果采用(SDS)或苯酚作蛋白质变性剂来分离核酸,它们同时也可以使核酸降解酶破坏,因此常获得较好的效果;一RNA的提取与测定;工业上常用稀碱和浓盐法提RNA,用这两种方法提取的核酸均为变性RNA。主要用于制备核苷酸的原料,其工艺较简单。 浓盐法:使用10%氯化钠的溶液,在90摄氏度提???3—4小时,经冷却,离心后上清液由乙醇沉淀RNA。 稀碱法: 使用0.2%氢氧化钠裂解酵母,然后用酸中和,除蛋白和菌体,上清液由乙醇沉淀RNA ,或调核酸等电点PI2.5沉淀。;RNA广泛存在啤酒酵母,面包酵母,酒精酵母和各种动物组织中。 本实验用动物肝脏经组织捣碎,制成组织匀浆,用0.14mol/L氯化钠溶液提取。把细胞之中的核糖核蛋白提取出来,留下含有DNA的细胞核物质,用酚将RNA和蛋白质分开。因为在0.14mol/L氯化钠溶液中,RNA-蛋白 (RNP)溶解度大;而DNA-蛋白(DNP)溶解度低,其在1mol/L氯化钠溶液中溶解度最大。;RNA含量测定;试剂和器材;RNA提取;RNA含量测定;思考题 RNA提取方法有几种?有什么优缺点? RNA提取过程中应注意什么? ;DNA的提取及含量测定;经常采用三种方法去除蛋白;DNA含量的测定;试剂和器材;DNA的提取;DNA含量测定;思考题;3g肝脏 + 20mL0.14mol/ L氯化钠 ;一RNA的提取与测定;RNA广泛存在啤酒酵母,面包酵母,酒精酵母和各种动物组织中。 本实验用动物肝脏经组织捣碎,制成组织匀浆,用0.14mol/L氯化钠溶液提取。把细胞之中的核糖核蛋白提取出来,留下含有DNA的细胞核物质,用酚将RNA和蛋白质分开。因为在0.14mol/L氯化钠溶液中,RNA-蛋白 (RNP)溶解度大;而DNA-蛋白(DNP)溶解度低,其在1mol/L氯化钠溶液中溶解度最大。;经常采用三种方法去除蛋白
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