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2021/3/17 * 2021/3/17 * 2021/3/17 * 2021/3/17 * 2021/3/17 * （二）、液体培养基分离 采用稀释发进行液体分离,必须在同一稀释度的许多平行试管中大多数95%以上表现为不生长。 （三）、单细胞（单孢子）分离法 单细胞分离法:采用显微分离法从混杂的群体中直接分离单个细胞或单个个体进行培养。 2021/3/17 * （四）、选择培养分离法 1用选择培养基直接分离 2富集培养 （五）、 二元培养法 如果培养物中含有二中微生物,而且是有意识地保持二者之间的特定关系的培养物称为二元培养物。 2021/3/17 * 第二节 微生物的观察与鉴定技术 一、微生物的菌落观察 菌落colony :是指由耽搁微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度形成的肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞生长群体。 菌落特征包括:菌落的形态、大小、边缘、质地、颜色 等,是微生物鉴定的重要依据 2021/3/17 * 放线菌菌落 2021/3/17 * 霉菌的菌落 2021/3/17 * 2021/3/17 * 二、显微镜观察技术 1普通光学显微镜 2 暗视野显微镜 3 相差显微镜 4荧光显微镜 5电子显微镜 2021/3/17 * 图4-1 普通光学显微镜 图4-2 普通光学显微镜的构造 2021/3/17 * 图4-5 显微镜的光路 2021/3/17 * 图4-3 研究型(相差、荧光)显微镜 图4-4 相差显微镜的成像原理 2021/3/17 * 图4-6 大肠杆菌 图4-7 黑曲霉 2021/3/17 * 图4-8 正在分裂的细菌 图4-9 孢子与酵母 2021/3/17 * 三、微生物的计数 1 菌落计数法 定量的样品经稀释后加到固体培养基上,根据培养基上的菌落数检测样品中的微生物含量。单位: cfu(colony forming units). 2 显微镜直接计数法（又称全数法） 观察一定面积玻片上的微生物总数。也可以用血球计数板等 2021/3/17 * 图5-1 Thoma血球计数板 A.正面图 B.纵切面图 1.血球计数板 2.盖玻片 3.计数室 2021/3/17 * 16小格 × 25大格计数室 25小格 × 16大格计数室 图5-2 计数室的两种刻度形式 2021/3/17 * 3 阻抗法: 通过测量微生物代谢引起的培养基电特性变化测定样品中微生物含量的一种快速检测方法。 培养基的电导率变化与生长曲线一致。 4 流动细菌计数法 : 培养物在液流中被稀释,细胞被轴向分开,当流动的细胞遇到激光光束时反射回的散射光可用于计数。 2021/3/17 * 5 放射测量法 把微量的碳14,引入碳水化合物中,根据放出的放射性二氧化碳量计数。 等 2021/3/17 * 四、微生物的鉴定 1 形态特征:菌落特征,微生物的形态。 2 生理生化:包括对碳源、氮源的利用,能量来源,各种酶活性、发酵、产酸等 微量生化系统检测:API、Enterotube系统。 3微热量法:microcalorimertry各种微生物代谢产生的热效应不同。 4化学特征:核酸特征（G+C, PCR, 16 sRNA ,基因探针,基因芯片,等） 5 免疫学特征:血清反应、免疫电镜技术、酶联免疫技术等 2021/3/17 * 第三节 动物实验模型 实验动物在食品微生物学中具有重要的地位: （1）食品病原的分离鉴定、毒力测定、分型 :动物实验快速、简便易操作。 （2）对食品微生物产生的功能因子进行生物学效应测定。 2021/3/17 * 一、食物中毒性细菌、毒素的检测 食物中毒菌:如沙门氏菌、致病性大肠杆菌、魏氏梭菌、蜡样芽孢杆菌、副溶血性弧菌、等产生毒素。引起食物中毒。 如: 金黄色葡萄球菌肠毒素的动物测定法:体重350~550克的幼猫,腹腔注射3~5ml或口服10~15ml菌培养液。4小时内,幼猫出现不适,呕吐腹泻体温升高,死亡现象。 P58 2021/3/17 * 二、 食物感染性微生物的检测 一些病原物在食品的生产加工中带入,在人们使用时可引起食物感染。较为常见的单核细胞增多性李氏杆菌、炭疽芽孢杆菌、结核分枝杆菌、布氏杆菌、猪丹毒杆菌等 如:单核细胞增多性李氏杆菌小鼠毒力试验:将从食品中分离的菌株接种到TSB-YE培养基中培养24小时。取小鼠腹腔注射,观察7天。接种后的小鼠因败血症而亡。 2021/3/17 * 第一节 无菌操作技术和灭菌技术 一、无菌操作的概念 无菌技术（ aseptic technique): 在操作过程中如分