植物病理学 实验二 植物病原菌物的一般形态观察和临时玻片制作.pptVIP

实验二 植物病原菌物的一般形态观察和临时玻片制作 李红叶 2014-03-05 一、目的要求 1、熟悉不同临时玻片的制作方法； 2、通过实验观察，认识菌物的营养体及其变态结构，认识菌物的子实体（繁殖体），有性和无性繁殖所形成的各种类型孢子。 二、实验材料和用具 1、各种病害标本 2、永久玻片、显微镜、擦镜纸、浮载剂(蒸馏水或乳酚油)、载玻片、盖玻片、挑针、刀片、小木块、吸水纸、酒精灯、火柴等。 三、内容与方法 1、临时玻片的制作 1.1 浮载剂：防止材料干燥和集中光线，以利观察 1.1.1蒸馏水，最方便和最常用 1.1.2乳酚油，其组成（100ml):苯酚结晶(加热融化)20 ml、乳酸20 ml、甘油40 ml、水20 ml。各成分充分混合后成为油性黏稠液体，具杀死和固定病原物的作用，可使干瘪的真菌孢子膨胀复原，还可使病组织变得略为透明。如在乳酚油中加入0.05%~0.1%的染料制成棉蓝乳酚油、藏红乳酚油等，能使菌丝或孢子略微着色，更便于观察。制作的玻片可长期保存。 1.2 临时玻片的制作 根据病原物的类型选择使用 1.2.1 涂抹法：细菌和酵母菌的培养物常用涂抹法制片； 1.2.2 撕取法：适用观察着生在寄主或基物表面的菌丝和孢子，寄主表皮细胞内的真菌菌丝、吸器和休眠孢子囊堆，以及病毒的内含体等； 1.2.3 粘贴法：适用于菌丝或子实体着生于病组织或基物表面的材料制片，特别适用于观察分生孢子在分生孢子梗上的着生情况； 1.2.4 挑取法：直接用挑针从病组织或基物(如培养基)上挑取表面的霉状物、粉状物或孢子团制成玻片，也可以先将埋生或半埋生的真菌子实体（如子座、分生孢子器、子囊壳等）连同部分病组织一同排列在载玻片上，再用挑针将病菌子实体剥离出来制片。 1.2.5 组织透明法：将少量病组织材料切成细丝后放在载玻片上滴加乳酚油后在酒精灯徐徐加热至蒸气出现，如此处理数次使植物组织透明，冷却后加盖玻片进行镜检。此法可以观察到病原物在寄主组织内的原有状态。 1.2.6 徒手切片：选取病状典型、病征明显的病组织材料，先在病征明显处切取病组织小块(边长5 -8 mm)，放在小木块上，用食指轻轻压住，随着手指慢慢地后退，用刀片的刀尖将压住的病组织小块切成很薄的丝或片，用蘸有浮载剂的挑针或接种针挑取薄而合适的材料放在一干净载玻片上的浮载剂液滴中央，盖上盖玻片，仔细擦去多余的浮载剂（注意浮载剂过多会使观察物出现晃动不稳定的现象），即制成一张临时玻片。 切片时，如果病材料较粗大或较硬，可用手指压紧后用锋利的单面刀片切；材料较小而柔软的可夹在新鲜的胡萝卜或马铃薯块中间，连同夹持物一起切成薄片。 病组织材料若很干燥，为防止切片时发生破碎，可先蘸少量水湿润软化后再切。 2、菌物的一般形态特征观察 2.1 菌物的营养体 无隔菌丝，永久玻片 有隔菌丝，从培养皿（A）中挑取少量菌丝，观察有隔菌丝。 2.2 营养体的变态结构 吸器：永久玻片，观察小麦白粉病菌的吸器。 附着胞：永久玻片，观察稻瘟病菌的附着胞，注意其形态、大小和色泽。 假根：永久玻片，观察甘薯软腐病菌孢子囊基部的假根的形态和色泽。 2.3菌组织和菌组织体 疏丝组织和拟薄皮组织 菌核：观察甘蓝菌核病病株上菌核，注意其形态、大小、色泽。横切油菜菌核病菌的菌核，再用刀片削下薄薄的小片制片，观察菌核内部的疏丝组织和外部的拟薄壁组织。 子座：由菌丝体或菌丝体和寄主组织共同组成的着生子实体的垫状物，其上形成无性或有性孢子。观察永久玻片上稻曲病菌头状子座切片，注意其内部结构与菌核的区别； 根状菌索：菌丝平行生长并纠结成绳索状物。取永久玻片，观察苹果或甘薯紫纹羽病的根状菌索。 2.4 无性孢子 游动孢子囊和游动孢子：永久玻片。 孢子囊和孢囊孢子：永久玻片。 分生孢子梗和分生孢子：柑橘绿霉病病菌菌落稀薄的绿霉处挑取少量霉状物制片，观察病菌的分生孢子梗和分生孢子，注意分生孢子梗的分支，分生孢子的着生情况。 厚垣孢子：永久玻片 2.5 有性孢子 卵孢子：小米白发病的卵孢子（黄褐色粉状物）制片，观察藏卵器内卵孢子的数目、形状和色泽等特征。 接合孢子：观察永久玻片上的接合孢子 子囊孢子： 担孢子 从蘑菇中取下小块菌褶，从菌褶边缘观察担子和担孢子。注意担子和担孢子的形态、色泽，每个担子上产生的担孢子数目。 担孢子 小梗 四、作业 4.1 绘制病原物的线条图 无隔菌丝和有隔菌丝（永久玻片和培养皿）； 疏丝组织和拟薄皮组织（菌核切片）； 游动孢子囊和游动孢子（永久玻片） 分生孢子（柑橘绿霉病菌或柑橘褐斑病菌，培养皿） 卵孢子（小米白发病）； 接合孢子（永久玻片） 子囊孢子 担子和担孢子（蘑菇） * *