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学科信息动态 XUEKEXINXI DONG TAI 敬业 奉献 自强 创新 昌大学 主审：何晓萍 编辑：谢钮荣 2005年7月 书馆制作 检索范围：Internet万方数据库学术期刊数据库 检索策略：1、蛋白质and肽 2、 激素and酶 3、 核酸 4、 生物膜 时间限制：2005年1月-7月 检索结果： 前脑啡肽原和热休克蛋白参与宿主对结核分枝杆菌感染的应答 关键词：蛋口质组；前脑啡肽原；热休克蛋口；巨噬细胞L937；结核分枝杆菌 结核病H前仍然是严重威胁人类健康的传染病Z-—，本研究利用双向电泳技术，结 合基质辅助激光解吸及电离飞行时间质谱技术，直接从蛋白质组水平分析巨噬细胞对 MTB感染的应答?随后，将蛋白质组学的数据与我们先前得到的基因组转录水平数据结 合，整合基因表达不同阶段的数据进行综合分析.Hiv (human immunod efficiency virus, Hiv)感染和吸毒人群的结核病发病率明显高于其他人群.结核病的致病菌——结核分枝 杆菌(Mycobacterium tuberculosis,以下简称MTB)与HIV被称为难兄难弟”,二者甚 至使用树突细胞相同的受体DCSIGH. MTH是典型的胞内致病菌，主要在人巨噬细胞等宿 主免疫系统的细胞内生存和繁殖，MTB感染的后果与巨噬细胞初期的应答反应有密切的 关系?研究MTB—宿主相互作用是认识MTB致病机理的重点和难点Z —，有助于新药的开 发和设计，为感染性疾病的防治提供基础?另外，寻找MTB感染与HIV感染及吸毒0问 的关系，研究HIV治疗药物与MTB治疗药物乞间的相互作用，也是更好地开发结核病和 AIBS控制药物的基础?利用双向电泳比较了由临床分离的结核分枝杆菌感染离体巨噬细 胞U937前后的全细胞蛋白组表达差异，肽指纹鉴定和生物信息学分析2个表达明显丄 调的斑点，确定它们分别为热休克蛋口 HSP105P和前脑啡肽原.比较蛋口质组学和转录 组学研究发现，热休克蛋白表达提高可能源于转录增加?提出了从神经免疫学角度研究 结核分枝杆菌致病和宿主免疫机理的新思路，为解释吸毒人群屮结核病高发病率提供了 基础。 摘自《西南师范大学学报(自然科学版)》2005年第1期 8R-MUC1核心肽融合蛋白的原核表达及纯化 关键词：MUC1；核心肽；精氨酸聚合体；重组融合蛋口质类；载体蛋口类；聚合酶链反 应/方法 构建蛋口质转导结构域8个精氨酸聚合体(8R)与MUC1核心肽融合蛋口的原核表达 载体，并表达、纯化出具有生物学活性的8R-MUC1核心肽融合蛋白。 方法：以PCR法从HSP65-MUCl-pET28a质粒屮钓取MUC1核心肽2个重复序列片段, 连入PMD18-T载体，然后用酶切、连接的方法从T载体上获得MUC1核心肽6重复序列 片段(MUCPT),将其克隆入含8R的pET26b+原核表达载体屮构建8R与MUCPT融合蛋白 (8R-MUCPT)表达载体。用TPTG诱导转化8R-MUCPT表达载体的大肠杆菌BL21(DE3),并 以银螯合层析法纯化8R-MUCPT融合蛋白。 结果：构建了 8R与MUC1核心肽6个重复序列片段的融合蛋白原核表达载体 8R-MUCPT-pET26b+,并在BL21(DE3)|表达了 8R-MUCPT融合蛋白，经银螯合层析获得纯 度为95. 5%的8R-MUC1核心肽融合蛋白。 结论：构建了 8R-MUC1核心肽融合蛋白原核表达载体并成功表达与纯化出具有生物 学活性的融合蛋白。蛋白质转导结构域(protein transduction do-main, PTD)是一类 在蛋白转导过程屮能高效穿过细胞膜的结构域，如來源于I【TV的Tat蛋白等。而精氨酸 聚合体(poly-arginine, R),如8R、10R和12R,同其他PTD相比,由于被细胞内化程 度高，近年來倍受关注，被认为是一?种很有前途的运载工具，可以将与之相融合的肽带 入主要组织相容性复合物(MIIC)类途径。MIX1是一种跨膜糖蛋白，在许多黏膜上皮细胞 呈低度表达，但在多种恶性肿瘤组织如乳腺癌、卵巢癌等高度表达，作为肿瘤抗原，MUC1 核心肽已成为刖)瘤特异性免疫治疗的较好靶点。肿瘤抗原一旦进入细胞内(主要是吞噬 细胞)，可与细胞内的MIIC类分子结合并被提呈到细胞表面，从而成为肿瘤疫苗。如将 精氨酸聚合体与MCC1核心肽体外融合，可利用精氨酸聚合体高效的蛋白转导特性，把 肿瘤抗原——MUC1核心肽带入细胞内以至提呈到细胞表面，使之成为一种非常有效的免 疫治疗制剂。本研究体外成功构建、表达、纯化了 8个精氨酸短肽(8R)与MUC1核心肽 的融合蛋A (8R-MUCPT),为MCC1核心肽靶向性肿瘤免疫特异性治疗奠定基础。本研究 构建了 MUC1核心肽重复序列3拷贝(6