植物组织培养 技能训练 原生质体的分离培养与细胞培养--原生质体的融合.pptxVIP

原生质体培养与体细胞杂交 ——原生质体融合方法;定义：原生质体融合也叫做体细胞杂交，使分离出来的不同亲本的原生质体，在人工控制条件下，相互融合成一体，形成杂种细胞，并进一步发育成杂种植株的技术。;一、原生质体融合意义; １９６０年英国生物学家科金发明了用酶脱除细胞壁的方法，给植物细胞融合技术扫清了第一道障碍。 在许多研究人员成功地进行了不同植物的细胞融合，并培养出了再生植株后，许多人开始尝试培育不同种属的超级杂交植物。 １９７８年，德国的梅罗帕斯博士用细胞融合的方法培育出了马铃薯（土豆）和番茄的杂交后代———薯番茄。 先用酶液除去马铃薯、番茄的细胞壁，然后将两种去壁细胞（原生质体）等量混合，在混合液中加进聚乙二醇溶液，使原生质体紧密粘聚，再用高钙和高ｐＨ溶液处理，结果，马铃薯与番茄两种原生质体的融合率竟高达４０％～５０％。他们也曾进行过有性杂交的实验，但都失败了。 ;;二、植物体细胞杂交的主要程序： 原生质体的制备 原生质体融合 杂种细胞的选择 杂种细胞的培养 杂种植株的鉴定;融合过程;三、融合方法; 无机盐诱导融合 高pH-高Ca离子 聚乙二醇(PEG)法 PEG结合高钙-高pH诱导法 电融合技术;(一)无机盐诱导融合: NaNO3法;1973年：Keller用pH10.5的50 mM CaCl2溶液在37℃时， 诱发烟草叶肉原生质体融合。;;;PEG法特点：;最为常用。 具体做法：在无菌条件下混合双亲原生质体----滴加PEG溶液，摇匀，静置---滴加高钙-高pH溶液，摇匀，静置---滴加原生质体培养液洗涤数次---离心获得原生质体细胞团---筛选---再生杂合细胞;(五)电融合技术; 在现代生物学研究中，细胞电融合是单克隆抗体制备、哺乳动物克隆以及抗肿瘤疫苗制备等必威体育精装版方法中的一个基本步骤。 与通过聚乙二醇（PEG）诱导细胞融合的化学方法相比，细胞电融合是一种更高效的方法。 Zimmermann教授于1978年创立了细胞电融合的方法。从那以后，他一直致力于进一步发展该技术。 ;1.电融合法原理; 施加直流电场后，形成串珠的原生质体在质膜接触处发生穿孔，开始遗传物质的交流。;细胞融合仪 ;A． 聚集通过双向电泳，细胞互相紧密接触 。 B． 融合脉冲采用仅仅15微秒的方波脉冲穿透细胞膜， 细胞膜随后发生融合。 C． 异核体期细胞膜完全融合，细胞质也完全混合。 只有细胞核仍然保持分离状态 D． 完全融合产物现在细胞核也发生了融合。 根据常识，染色体数量下降。;燕麦原生质体的融合;其他方式融合; 神舟四号飞船上进行的太空细胞顺利融合，返回舱里的电融合仪内孕育出首批国产太空生命 。;二十世纪 80 年代末， 细胞电融合技术被用于从胚 胎细胞克隆哺乳动物。 ;三、体细胞杂种细胞筛选与鉴定;1.互补选择法;2、机械筛选法;异硫氰酸荧光素（FITC）：绿色 异硫氰酸罗丹明（RITC）：红色;体细胞杂种植株的鉴定;1、形态学鉴定;2、细胞学观察;3、DNA内切图谱分析;1、细胞杂交产生的新品种或新种应具有 A、多种利用价值的新经济植物， B、将一种植物的抗性（抗病、抗寒等）转入另一植物。 C、使低光合作用效率的植物转变成高光效植物。 D、将豆科植物的共生结瘤固氮能力转入非豆科植物。 E、得到高含量次生代谢产物（生物碱等）的植物。;课后作业;