动物微生物应用技术 细菌及细菌类疾病的实验室诊断 细菌标本片的制备.pptVIP

动物微生物应用技术 教 师：刘莎莎 掌握细菌常用标本片的制作及染色方法； 认识革兰氏染色的反应特性； 一、实训目的 二、实训器材 病料、细菌培养物、接种环、玻片、酒精灯、染色缸、染色架、染色液等。 三、实训内容 （一）细菌标本片的制作 （二）血液推片的制作 （三）常用的细菌染色方法 （四）常用染色液的配制 （五）注意事项 （一）细菌标本片的制作 1.涂片 2.干燥 3.固定 固体培养物：取清洁载玻片一块，用吸管吸取生理盐水1滴置于玻片中央，再将接种环在火焰上灭菌，待冷后从固体培养基上挑取少许菌落，置于玻片上的生理盐水中混均匀，并在玻片上涂成直径约为1cm的涂面，要求薄而均匀。 （一）细菌标本片的制作 1.涂片 液体培养物：取清洁载玻片一块，将接种环在火焰上灭菌，待冷后取一滴培养液或液体，置于玻片中央，混均匀，涂成直径约为1cm的涂面。 病变组织抹片：做无菌切开，用切面在玻片中央触一下或压印成一薄层即可。 （一）细菌标本片的制作 1.涂片 在室温下自然干燥，必要时将涂面向上，置火焰上方30～40cm来回微烤使其干燥。 2.干燥 火焰固定：将干燥后的玻片涂面向上，在火焰上快速来回通过2～3次，其温度以手背接触玻片底面感觉微烫手为宜。 化学固定：将干燥后的玻片浸入甲醇（乙醇、丙酮）中，或在玻片上滴数滴甲醇，2～3分钟后自然挥发干燥。 3.固定 （二）血液推片的制作 取一张边缘整齐的载玻片，用其一端蘸取一滴血液，在另一张干净无油脂的载玻片上，以45°角度均匀地推成一薄血涂片，以红细胞不重叠为宜。 1.取血：将血液滴在载玻片上。 2.推片：以左手拿该片，用另一个载玻片作推片，在左手载玻片上由前向后接触血滴，使两载玻片约成45°角，轻轻移动，使血滴成一直线，然后由前向后推为一均匀的薄片。 * * 让血液粘附在推片上 推出均匀的血膜 * * 窍门：将载玻片的一端垫起，有助于推出均匀血膜。 * * 做细菌涂片时，不宜涂得过厚，以免影响制片效果。 固定必须确实，火焰固定时不宜温度过高，以免破坏菌体结构。 每种染液染色的过程中应保持染色液不干，尤其加热染色的染液，在染色过程中应随时添加，以免蒸发干，影响染色效果。 每种染液染色后，应用水将染液一起冲掉，不可先将染液倾去后再用水冲洗。 注意事项： 本次课 就到这里了！ 再见 ！ * * * * * * * * * * * * *