基因工程期末复习总结.docVIP

一、单选 第一个实现DNA重组的实验 :1972年，美国斯坦福大学医学中心的P.Berg在世界上第一次成功地实现了DNA的体外重组。 第一次实现重组体转化成功的实验 ：1973年，科恩（Coher）和博耶（Boyer）建立的基因工程基本模式 。 基因工程研究的主要内容：切接转增检。 基因工程研究的基本要素：基因、工具酶、载体、受体细胞。 DNA在生物体内的存在状态：染色体DNA、病毒DNA（噬菌体DNA）、质粒DNA、线粒体DNA和叶绿体DNA，有的以线型存在，有的以环状存在。 天然DNA提取的步骤：生物材料的准备、裂解细胞、分离抽提DNA。 DNA的分离抽提法：酚-氯仿抽提法（常用、经典）。 DNA的保存：温度越低越好，同等条件下，温度越低越不容易降解。 为了消除在制备RNA过程中RNA酶的污染，应用0.1% DEPC处理过的水配制试剂。 人工合成DNA片段的方法有化学合成法和聚合酶链式反应扩增法。 紫外分光光度法检测核酸样品的纯度（常用），纯净的核酸溶液的0D260/OD280值应为1.7~2.0，0D260/OD230值应大于2.0，如果0D260/OD280小于1.7，可能有蛋白质污染，如果0D260/OD280大于2.0或0D260/OD230小于2.0时，核酸溶液中可能存在其他干扰物质。 工具酶就其用途而言可分为三大类：限制性内切酶、连接酶和修饰酶。 通常提到的限制性核酸内切酶主要指Ⅱ类酶而言，限制性核酸内切酶的命名：属名+种名。例如：Bacillus amylolique faciens H、 Haemophilus influenzae d Ⅰ→ Bam H、HindⅠ。“属种株序” 限制性内切核酸酶的本质：细菌细胞的限制—修饰系统。 限制性内切核酸酶的作用机制：识别双链DNA中特定的核苷酸序列（识别序列），并在识别序列上使每条链的一个磷酸二酯键断开。 常用的酶切方法：单酶切、双酶切和部分酶切。 承载外源DNA的大小排序：质粒（20kb）噬菌体（20-30kb）cosmid载体（40-50kb）人工染色体载体（100-1000kb）。 受体细胞的种类:1）原核生物细胞 例：大肠杆菌；枯草芽孢杆菌；蓝细菌；2）真核生物细胞 包含 酵母细胞、植物细胞、动物细胞。 19、常用于分子杂交的探针标记物可分为放射性及非放射性两大类，非放射性探针包括生物素标记探针、地高辛标记探针、荧光素标记探针。 20、根据待测核酸的来源以及将其分子结合到固相支持物上的方法的不同，核酸分子杂交检测法可分为菌落印迹原位杂交、斑点印迹杂交、Southern印迹杂交（DNA）和Nothern印迹杂交（RNA）四类。 （PS:如果只要检测克隆菌株、动植物细胞株或转基因个体、器官、组织提取的总DNA或RNA样品中是否含有目的基因，则可采用斑点印迹杂交(dot blotting)或狭线印迹杂交(slot blotting)进行检测。 菌落（或噬菌斑）原位杂交是直接把菌落或噬菌斑印迹转移到用于杂交的膜上，经溶菌和变性处理后使DNA暴露出来并与滤膜原位结合，再用DNA探针与其杂交。） 21、重组子筛选的方法： 1）遗传表型直接筛选2）依赖于重组子结构特征分析筛选3）核酸分子杂交分析4）免疫化学分析检测5）PCR筛选法。 22、重组基因导入受体细胞的方法：Ca2+（诱导大肠杆菌）转化法、电激穿孔、基因枪法、显微注射法、病毒转染法 名词解释 多克隆位点（MCS）：是包含多个（最多20个）限制性酶切位点的一段人工DNA序列。 衔接头：化学合成的寡核苷酸，含有一种以上的限制性核酸内切酶识别序列。其一端或两端具有一种或两种内切酶切割产生的黏性末端。 限制性内切核酸酶：识别双链DNA中特定的核苷酸序列（识别序列），并在识别序列上使每条链的一个磷酸二酯键断开的一类酶，简称限制酶。 回文序列：DNA 片段上的一段所具有的反向互补序列，常是限制性酶切位点。 同裂酶：识别相同序列的限制性内切酶称为同裂酶。它们的切割位点可能不同 同尾酶：切割不同的DNA片段，但产生相同的粘性末端的一类限制性内切酶。 星性活性：在极端非标准条件下，限制酶能切割与识别序列相似的序列，又称Star活性。 克隆载体：一种能携带外源DNA片段进入受体细胞，并在受体细胞中得以维持或表达的DNA分子。 （质粒的）不亲和性：在没有选择压力的情况下，两种亲源关系密切的不同质粒，不能够在同一个寄主细胞系中稳定地共存的现象。 显性质粒（表达型质粒）：指携带除与自身复制和转移相关的基因，还携带一些使宿主细胞呈现新性状基因的质粒。 隐蔽质粒：不能使宿主细胞呈现新性状的质粒。 基因组文库：指贮存了某种生物全部基因信息的一个受体菌群体。 cDNA 基因文库：某种生物材料的基因转录产物