细菌内毒素检查法标准操作规程.docxVIP

细菌内毒素检查法标准操作规程 目的： 建立细菌内蠹素检查的基本操作，为细菌内蠹素检查人员提供正确的操作规程。 依据： 《中华人民共和国药典》2000年版二部。 范围： 本标准适用丁细菌内蠹素检查的操作。 职责： QC细菌内蠹素检查人员对本标准的实施负责。 程序： 定义： 细菌内蠹素检查法：本法系利用蜜试剂与细菌内蠹素产生凝集反应的机理， 以判断供试品中细菌内蠹素的限量是否符合规定的一种方法，内蠹素的量用内蠹素单位 （EU）表示。 细菌内蠹素国家标准品：系自大肠杆菌精制得到的内蠹素，用丁标定、复核、 仲裁蜜试剂灵敏度和标定细菌内蠹素工作标准品的效价。 细菌内蠹素工作标准品：系以细菌内蠹素国家标准品为基准进行标定，确定 其重量相当效价，每1ng工作标准品效价应不小丁 2EU,不大丁 50EU。细菌内蠹素工作标 准品用丁试验中蜜试剂灵敏度复核干扰试验及设置的各种对照。 细菌内蠹素检查用水：系指与灵敏度为 0.03EU/ml或更高灵敏度的蜜试剂24 小时不产生凝集反应的灭菌注射用水。 实验设备：电热干燥箱（50~300土 1） C、电热包温水温箱。 实验用具：注射器（精度0.02ml）、针头、试管架、白胶布、砂轮、75%洒精棉球、金届 直镶、注射器盒、时钟。 试剂：蜜试剂（其标示值用 入表示）、内蠹素工作标准品、内蠹素检查用水。 用具除热原：试验中所用的试管、注射器、针头、金届直镶等冲洗干净，置电热 干燥箱中（注射器、针头、金届直镶等放入注射器盒中封好，再放入干燥箱中） ，经250C加 热30分钟，除去热原。 检查法： 打开洁净工作台的风机及照明开关，并用 75%洒精棉球擦拭台面，打开包 温水温箱的开关，使水温包定在（37 + 1） C。 用75%洒精棉球擦手消蠹。 内蠹素阳性对照溶液的制备： 取内蠹素工作标准品1支，用75%洒精棉球消蠹瓶颈，用砂轮割开瓶颈。 用注射器吸取1ml内蠹素检查用水，加入到内蠹素工作标准品中，混匀，作为 内蠹素标准品溶液，再从中取出适量，稀释成 2.0入浓度的内蠹素溶液，作为内蠹素阳性对 照溶液。 供试品溶液的配制： 供试品的最大有效稀释倍数（MVD）的计算： MVD=CL/ 入 式中：L为供试品的细菌内蠹素限值 C为供试品溶液浓度 入为蜜试剂灵敏度的标示值。 取供试品适量，加入内蠹素检查用水，制成按最大有效稀释倍数稀释的供试品 溶液。 供试品阳性对照液的配制：从前面的内蠹素标准品溶液中取出适量，加入适 量的供试品溶液，稀释成浓度为 2.0入浓度的供试品阳性对照液。 取0.1ml/支规格的蜜试剂原安瓶5支，用75%洒精棉球消蠹瓶颈。 在安瓶瓶颈处一侧先贴上一小条白胶布，在另一侧用砂轮轻划数下，从划 痕处轻轻掰开瓶帽，使瓶帽正好粘在白胶布上，把安瓶放在台面上。 每支中均加入细菌内蠹素检查用水 0.1ml,混匀，5支蜜试剂安瓶均如此操 作。 向其中两支中各加入0.1ml供试品溶液作为供试品管。 1支中加入0.1ml2.0入浓度的内蠹素阳性对照液作为阳性对照管。 1支中加入0.1ml细菌内蠹素检查用水作为阴性对照管。 1支中加入0.1ml供试品阳性对照液作为供试品阳性对照管。 将安瓶中溶液轻轻混匀后，将粘在白胶布上的瓶帽与割开瓶颈处对正 ，并封 好白胶布，放到试管架上并标明编号。 把试管架垂直放入（37土 1） C适宜水温的包温水温箱中，保温（60 土2）分钟。 5.5.结果判断: 将试管架从水浴中轻轻取出，缓缓倒转 180°时，管内凝胶不变形，不从管 壁滑脱者为阳性，记录为（+）;凝胶不能保持完整，并从管壁滑脱者为阴性，记录为（ 供试品2管均为（-）应认为符合规定，如2管均为（+）应认为不符合规定。 如两管中1管为（+）, 1管为（-）按上述方法另取4支供试品管复试：4 管中有1管为（+）即认为供试品不符合规定。 阳性对照为（-）或供试品阳性对照为（-）或阴性对照为（+）均认为试验无效。 附: 细菌内蠹素检查记录 ZL0086 00。