分子生物学实验课件 1实验准备和试剂配置.pptVIP

* * 具体的实验准备工作（1） （1）整理和打扫实验室 （2）清洗玻璃器皿等并烘干： 烧杯、量筒、试剂瓶、锥形瓶、10mL移液管、玻璃涂棒、培养皿、玻璃棒 * * 具体的实验准备工作（2） （3）包扎需要灭菌的器具和耗材： 1.5mL小离心管、50mL离心管、tip头、10mL移液管、玻璃涂棒、培养皿 （4）使用TOMY全自动灭菌锅，121℃高温湿热灭菌20min： 1.5mL小离心管、50mL离心管、tip头、10mL移液管、玻璃涂棒、培养皿 （5）取出灭菌完毕的物品置烘箱中烘干备用 （6）制作与锥形瓶配套使用的棉塞 （7）制备酒精棉球 * * TOMY SS-325/245自动蒸汽消毒柜 （1）检查排放蒸汽的水壶，腔体内的水位与托板齐平。 （2）SET键设置温度和时间（121℃，20min） （3）关闭排气阀，Start机器开始运行，Check Heat检查设置的温度，Stop键终止机器运行。 （4）程序运行结束，旋开排气阀或机器自行排气至压力为0。温度降至80℃以下压力为0时方可开盖。运行过程中勿接触盖子。 （5）腔体内经常清洁。 * * 实验目的 通过本实验，掌握常用LB液体/固体培养基和质粒提取试剂的配制方法和技术，为接下来的实验作准备。 * * 分子生物学实验 2015年3月 课件作者:蒋华云 * 课程介绍 实验课名称：分子生物学实验 36学时 2学分 参考教材：《分子生物学实验指导》魏群 主编，高等教育出版社 参考资料：《分子克隆 实验指南》【美】J.萨姆布鲁克 E.F.弗里奇 T.曼尼阿蒂斯 著 科学出版社 《精编分子生物学实验指南》F.奥斯伯等 科学出版社 成绩评定：平时成绩+操作考试成绩 +笔试成绩 2015年3月 课件作者:蒋华云 * 2015年3月 课件作者:蒋华云 * 实验一、实验准备与试剂配置 2015年3月 课件作者:蒋华云 * 具体的实验准备工作 清洗玻璃器皿等并烘干 烧杯 量筒 试剂瓶 锥形瓶 10mL移液管 玻璃涂棒 培养皿 玻璃棒 容量瓶 整理和打扫实验室 清洗 烘干 包扎、灭菌 烘干备用 洁净保存 2015年3月 课件作者:蒋华云 * 具体的实验准备工作 包扎需要灭菌的器具和耗材 1.5mL小离心管、100mL离心管、吸头、10mL移液管、玻璃涂棒、培养皿 使用TOMY全自动灭菌锅，121℃高温湿热灭菌20min 1.5mL小离心管、100mL离心管、吸头、10mL移液管、玻璃涂棒、培养皿 取出灭菌完毕的物品置烘箱中烘干备用 制作与锥形瓶配套使用的棉塞 制备酒精棉球（75%酒精） 2015年3月 课件作者:蒋华云 * TOMY全自动灭菌锅的使用 （1）检查排放蒸汽的水壶，腔体内的水位与托板齐平。 （2）SET键设置温度和时间（121℃，20min） （3）关闭排气阀，Start机器开始运行，Check Heat检查设置的温度，Stop键终止机器运行。 （4）程序运行结束，旋开排气阀或机器自行排气至压力为0。温度降至80℃以下压力为0时方可开盖。运行过程中勿接触盖子。 （5）腔体内经常清洁。 2015年3月 课件作者:蒋华云 * LB液体/固体培养基的配制及质粒提取试剂的配制 2015年3月 课件作者:蒋华云 * 实验目的 通过本实验，掌握常用LB液体/固体培养基和质粒提取试剂的配制方法和技术，为接下来的实验作准备。 2015年3月 课件作者:蒋华云 * 实验仪器 电子天平 台式天平 分析天平 磁力搅拌器 TOMY SS-325自动蒸汽消毒柜 pH酸度计 2015年3月 课件作者:蒋华云 * 磁力搅拌器 2015年3月 课件作者:蒋华云 * 试剂配制 LB液体培养基（1000mL） 将胰蛋白胨（bacto-typtone）10g，酵母提取物（bacto-yeast extract）5g，氯化钠10g完全溶解在950mL去离子水中，用NaOH调节pH至7.0，加入去离子水至总体积为1000mL，121℃湿热灭菌20min。冷却后4℃保存备用。 灭菌前，分装LB液体培养基50mL/瓶分装8瓶，剩余的600mL制备固体LB培养基：LB液体培养基分装成200mL/瓶分装3瓶，每瓶加入3g琼脂粉，沸水浴溶解，包扎灭菌。 注意 2015年3月 课件作者:蒋华云 * 试剂配制 固体LB培养基：每升LB培养基中加15g琼脂。 LB液体培养基200mL/瓶中加琼脂3g，包扎灭菌。灭菌结束后，要趁热将融化的固体LB培养基摇匀，冷却后4℃保存备用。 注意 2015年3月 课件作者:蒋华云 * 试剂配制 溶液Ⅰ(pH8.0)(100mL） 50mmol/L葡萄糖 25mmol/L Tris·HCl(pH8.0) 10mmol/L EDTA(pH8.0) 称量→溶解→调节pH值→定容→灭