大肠杆菌培养操作规程.pdf

大肠杆菌培养操作规程 一、 目的及适用范围 制订本规程的目的为规范大肠杆菌总 RNA的制备，保证为诊断试剂产品提供质 量可控的质控品及标准品基质。本规程适用于南京实验室提取大肠杆菌总 RNA的操 作。依照本操作规程，每次可提前大约提取基质液原液 2.7ml 。 二、 常规时间安排 预计安排 步骤 耗时评估 耗材准备 20min PBS储存液配置 40min 第一天 培养基配制 20min 灭菌 3h 领取菌种 10min 菌种复苏 9h 第二天 接种 40min 分装培养 13h RNA完全提取根据需求，自行安排。 三、 培养用耗材准备 1、 锥形瓶、双层铝箔、棉绳 2、 包扎一盒 1ml 的枪头， 50ml 康宁冻存管 四、 培养基配制 ( 早上 ) 培养基应现配现用，每次配置 350ml，一次性使用完毕。 1、 按下表称取物资配置 LB培养基到 500ml 锥形瓶中： 例如：配制 350mlLB 培养基配方如下： [ 配置双份 ] 蛋白胨 氯化 酵母提取物 成分名称 去离子水 TRYPTONE 钠 YEAST XTRACT 称取质量 3.5g 3.5g 1.75g 补足 350ml 2、 用双层铝箔和棉绳对锥形瓶进行封口，摇晃锥形瓶以使各物质迅速、均匀、 完全、溶解。待灭菌。 五、 PBS溶液配制 1、 10XPBS不需要每次生产都配置，生产前跟检查 PBS量是否充足，如充足则 可跳过该步骤。 2、 配制 10XPBS缓冲液备用；例如配制 1000L10XPBS储存液，取 1000ml 配液 瓶，根据下表称取各物质。用去离子水定容至 1000ml 。 名称 称取量 浓度 10X H2 O 1000ml NaCl 80.0g