模板HPLC实验步骤和方法开发.pptVIP

流动相极性 .......... * 流动相洗脱强度 反相色谱最常用的流动相及其洗脱强度： 水 甲醇乙腈 乙醇丙醇异丙醇四氢呋喃 最常用的流动相组成“甲醇-水；乙腈-水” 正相色谱最常用的流动相及其洗脱强度： 正己烷乙醚乙酸乙酯异丙醇 **应用添加剂，成为离子对、离子抑制方法 .......... * 流动相的选择原则 样品易溶，且溶解度尽可能大 化学性质稳定，不损坏柱子 不妨碍检测器检测，所选波长处无吸收 * 黏度低，流动性好 * 无毒或低毒，易于操作 易于从其中回收样品 易于制成高纯度，即色谱纯 废液易处理，不污染环境 .......... * 三）方法开发的具体步骤 先用一根短的色谱柱 用相对较高的流速 使用尽可能纯度高的标准品 先用高强度的洗脱液 调节k’ 值改变保留值 调节a值改变选择性 通过改变流动相的pH值，使样品成中性 加入“对离子”，使样品呈中性 调节柱长度改变柱效及分离速度 .......... * 反相色谱的方法开发 开发过程实例 色谱条件∶ 色谱柱：C18，4.6mm×15mm 流动相：乙腈/水，乙腈从100%逐渐降低（或走梯度） 举例中用不同的溶剂强度，60/40、50/50、40/60，由强渐弱 流速：1ml/min 样品： ① 对羟基苯甲酸甲酯(Methyl Paraben) ② 对羟基苯甲酸丙酯(Propyl Paraben) ③ 对羟基苯甲酸丁酯(Butyl Paraben) .......... * 1.改变容量因子 K’ 谱图 .......... * 2.调节α值改变选择性 同样强度的不同溶剂，改变了流动相α值 改变色谱柱 .......... * 离子型化合物的色谱分离 离子型化合物的分离方式 多数化合物是离子型的！ 使用离子交换柱：离子交换法 主要用于“强”阴、阳离子 使用反相柱 离子抑制色谱法：通过改变流动相的pH值，使样品成中性 离子对色谱法：加入“对离子”，使样品呈中性 .......... * 3.离子抑制色谱 离子型化合物在反相色谱柱上不保留 改变流动相的pH值，抑制样品离子的电离使样品成中性 适用于弱酸性化合物的分离 加入TFA,磷酸盐等降低流动相的pH值，使样品降低离子化 使用硅胶基质C18填料 使用条件应在填料基质的范围内 硅胶柱的pH在2-8（较保险值3-7）内 .......... * 离子抑制色谱实例 而在乙腈/水并且pH=7时，多数组份保留时间很短，无法完全分离。 .......... * 离子抑制色谱的使用范围 下列情况下不能使用离子抑制方法，如果： 一些酸在pH低于2时还保持离子化 一些碱在pH高于7时还保持离子化 可以有以下的选择 离子交换色谱 使用聚合物或其他耐碱性流动相的反相柱，在pH高于7时用离子抑制法 使用“离子对色谱法” .......... * 4.离子对色谱法 在反相色谱流动相内加入“离子对”试剂 与样品中可电离的组份形成“对离子” 在反相色谱柱上分离离子型化合物 离子对试剂的类型 季铵盐、叔胺盐 （正离子），适用于弱酸 烷基磺酸盐、高氯酸盐（负离子），适用于弱碱 烷基长度不同，形成对离子的能力不同 .......... * 离子对色谱机理 .......... * 离子对色谱的应用 抗组胺及减充血剂药物的分析 .......... * 离子对色谱分析水溶性维生素 .......... * 用离子对、还是用离子抑制方法？ .......... * 方法开发的其他因素 流速对柱效的影响 不同内径的色谱柱有自己的最佳流速 样品的进样量(浓度)对柱效的影响 样品的进样体积对柱效的影响 溶剂粘度对柱效的影响 以上因素均影响分离度 .......... * 色谱方法转换 如果没有与文献或要求相近的色谱柱 转换进样量 转换流速 .......... * 四）液相色谱方法开发 梯度洗脱方法 .......... * HPLC的应用领域 在医药研究中分析应用 药物分析有USP、BP、CP等标准 常用药物研究中的应用：解热镇痛药、镇静药、安定药、心血管药、磺胺类消炎药等。 甾体药物研究中的应用：肾上腺皮质激素、雄性激素、雌性激素和孕激素等。 抗菌素类药物研究中的应用：青霉素、头孢菌素、庆大毒素、四环素、氯霉素、诺氟沙星等。 中草药研究中的应用：生物碱、甙类(皂甙、强心甙、黄酮甙等)、萜类 手性药物研究中的应用：光学异构体的拆分(如解毒剂D-青霉胺毒性小，L-异构体毒性很强) 医疗药物的检测、新药研究、药物代谢、药代动力学研究。