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煮辞州大学 皮层神经元细胞原代培养 可主要内容: 4 实验原理准备工作实验步骤影响因素 1实验原理 ◆细胞培养是生物学和医学研究中最常用的手段之 可分为原代培养和传代培养两种。 ◆原代培养:将动物机体的各种组织从机体中取 出,经各种酶(常用胰蛋白酶)、螯合剂(常用 EDTA)或机械方法处理,分散成单细胞,置合适 的培养基中培养,使细胞得以生存、生长和繁殖 2 实验准备 仪器、材料与试剂 无菌操作台,培养箱 实验仪器 培养板,青霉素瓶,离心机,计数板 冰盒,滤器(200目自制),手术器械 新生鼠 材料与 试剂 DMEMF12培养基(20%血清),025%胰酶 多聚赖氨酸,碘酒,75%酒精,PBS,阿糖胞苷 2 实验准备 实验前准备工作 培养板包被 制备冰盒 培养基,阿糖 胞苷配制 ==,----- 0.1%多聚赖氨酸包被 实验步骤 要点 细节决定成败 细心 耐心 2 实验步骤 胰酶消化法 1准备:取名种2滑奋的培用品宽涂华台面紫绯 擦拭手及台面 2布局 点燃酒精灯,安装吸管帽;准备离心管;平皿及器 械放置妥当 2 实验步骤 布局 剥离血管及筋膜 广器减 酒精 PBS PB BS 断头 剪碎组织块 冰盒 取脑,分离皮层神经 清洗血液 元 实验步骤 3断头取脑:超净台内,断头取脑,置于盛有PBS的培养皿 内,洗涤3次,弃除表面残余血迹,迅速置于无 菌的生理盐水冰浴上 4剥离软脑膜:剥离大脑皮层至预冷的PBS中,用两把无齿弯 镊仔细剥离软脑膜和血丝,剥离干净后用PBs 液洗23遍 实验步骤 5剪碎 将大脑皮层转移到另一装有PBS的平皿中,用 手术剪将其剪成小块(1mm3),用PBS液洗 三次,转移至离心管中离心1000rpm×5min。 6消化:加入025%胰蛋白酶,放入37℃培养箱消化 20min,中间翻转振荡一次。使细胞分离
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