山东省部分地区肉鸡养殖场大肠杆菌的分离鉴定及耐药性分析.pdf

符 号 说 明 Bp: Base pair, 碱基对 CFU: Colony-forming unit, 菌落形成单位 CLSI: Clinical and laboratory standards institute, 美国临床实验室标准化协会 ColB: Colistin B, 多黏菌素B ColE: Colistin E, 黏菌素 ddH2O: Double distilled water, 双蒸水 E.coli : Escherichia coli, 大肠杆菌 EMB: Eosin-Methylene Blue Agar, 伊红美蓝培养基 ESBL : extended-spectrum β-lactamase, 超广谱β- 内酰胺酶 I: Intermediate, 中介 LB: Luria-bertani medium, LB-培养基 MAC: MacConkey Agar, 麦康凯琼脂培养基 MDR: Multidrug resistant, 多重耐药 ml: Milliliter, 毫升 NCBI : National Center for Biotechnology Information, 美国国家生物技术中心 R: Resistance, 耐药 S: Sensitive, 敏感 TAE buffer: Tris-acetate-EDTA buffer, 核酸缓冲液 PCR: Polymerase Chain Reaction, 聚合酶链式反应 μl: Microlitre, 微升 目 录 中文摘要 I Abstract IV 1 前言1 1.1 肉鸡产业概述1 1.2 大肠杆菌病概述1 1.3 E.coli 病原学特点2 1.3.1 E.coli 生理特点2 1.3.2 E.coli 生化特点2 1.3.3 E.coli 抵抗力3 1.3.4 E.coli 致病性3 1.3.5 E.coli 的危害3 1.4 细菌耐药性的国内外研究现状4 1.4.1E.coli 耐药性的研究现状4 1.4.2E.coli 耐药机制概述11 1.4.3 E.coli 耐药基因水平传播机制12 1.4.4 E.coli 的耐药性检测13 1.5 研究的目的和意义14 2 材料与方法15 2.1 材料15 2.1.1 样本采集15 2.1.2 培养基16 2.1.3 试剂16 2.1.4 药敏纸片16 2.1.5 仪器16 2.2 方法17 2.2.1 E.coli 的分离纯化17 2.2.2 微生物质谱仪鉴定17 2.2.3 E.coli 的菌株保存17 2.2.4 药敏试验17 2.2.5 耐药基因的检测18 2.2.6 扩增产物的测序及序列分析18 2.3 数据分析20 3 结果与分析2 1 3.1 E.coli 的初步筛选2 1 3.2 E.coli 的鉴定2 1 3.3 山东地区E.coli 的流行情况22 3.4 E.coli 的药敏试验检测结果23 3.5 多耐药以及优势耐药谱分析结果26 3.6 E.coli 耐药基因的检测结果28 3.7 其他微生物的鉴定情况34 4 讨论35 5 结论40 6 参考文献41 7 附录51 8 致谢60 9 攻读学位期间发表论文情况6 1 山东农业大学硕士专业学位论文 中 文 摘 要 山东省肉鸡年出栏量达16.48 亿只，鸡肉产量达232.8 万吨，居全国首位，是我国 的肉鸡产业大省。肉鸡养殖业大发展同时，动物疾病、畜禽废弃物污染、畜禽产品食品 安全与品质等养殖业的难题也伴随产生。大肠杆菌（Escherichia coli ）广泛存在于整个 饲养环节，乃至于食品链中。致病性大肠杆菌引起的禽类感染，是养殖业的难题之一， 耐药性的增加使该菌的防控变得更困难。不同来源的E.coli 之间，甚至E.coli 和其它细 菌之间也存在广泛的耐药基因的转移，导致E.coli 的耐药性问题，不仅造成严重的经济 损失，还会引发食品安全问题和公共卫生问题，危害人类健康。在世界各国一致认为细 菌耐药性的问题会深远影响世界经济的背景下，E.coli