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脓汁和粪便标本中病原菌的检测 2011 级第二临床医学院临床五年制 第 7 组 学号 姓名 一、实验目的 1. 脓汁和粪便标本据有不同的病原菌， 本实验主要探究检测 其病原菌的类型并通过一系列的观察与鉴定从而确定其 病原菌的名称和性质。 2. 学习培养基的制备、消毒和灭菌， 细菌的分离与培养， 细 菌群体和个体形态特征的观察，细菌生化反应鉴定等技 巧。从中掌握微生物实验的各种操作方法， 培养对微生物 实验的兴趣。 二、实验器材 1.器材 接种环 接种针 打火机 油性笔 酒精灯 污物盘 普通 冰柜 隔水式电热恒温培养箱 奥林巴斯 CX21 型生物显微镜 试管（带棉塞） 刻度吸管 洗耳球 称量纸 药勺 牛皮纸 硫 酸纸 橡皮筋 尺子 锥形瓶 高压蒸汽灭菌器 镊子 玻片 吸 水纸 拭镜纸 2.试剂药品 干粉培养基 蒸馏水 脓汁标本 粪便标本 石蜡油 乙醇 和乙醚（ 7:3 ）混合液 生理盐水 结晶紫 卢戈碘液 95% 乙 醇 稀释复红 葡萄糖微量发酵管 （2 支） 乳糖微量发酵管 （2 支） 青霉素抗菌素纸片 链霉素抗菌素纸片 庆大霉素抗菌 素纸片 兔血浆 诊断血清（痢疾血清） 三、方法与步骤 1.培养基的制备 干粉培养基→蒸馏水→加热溶化→分装→集中放在试 管筐里，然后罩上硫酸纸，牛皮纸，用橡皮筋扎好 →放入 讲台边的高压灭菌筐内→送到高压灭菌室灭菌→摆斜面，倾 注平板→检定培养基的效果→ 4 ℃冰箱保存备用（制备出普 通平板 6 个，依红美蓝平板 2 个，固体斜面培养基 4 个，液 体培养基 4 个，半固体培养基 4 个） 2. 细菌的分离与培养 (1) 细菌的分离： 烧灼灭菌接种环→分别取脓汁标本与粪便标 本点在普通平板和依红美蓝平板上，各做两份→烧灼接种环 上的多余的标本→在平板上划曲线→移动平板依次划五区 （如图 1 所示）→接种环烧灼灭菌→平板倒置，做好标记→ 37 ℃培养 18-24 小时→备用。 图 1 (2) 细菌纯培养：先观察上述（ 1 ）实验中平板分离出来的菌 落→接种环烧灼灭菌→挑选平板上典型的四种单菌落（白 色、黄色、紫黑色、粉红色）进行斜面接种纯培养，并做好 标记→接种环烧灼灭菌→培养不得超过 18 小时→保存备用。 3.液体培养基接种 接种环烧灼灭菌→分别取斜面培养实验中培养得到的四 种菌苔适量接种到液体培养基中→接种环烧灼灭菌→ 35 ℃ 培养 4-6 小时，备用。 4. 细菌个体形态特征的观察 （1 ）玻片标本制备。取两块玻片，在每块玻片上加生理盐 水 3