高效液相色谱仪基础培训课程.pptVIP

流动相储液瓶 单元或多元泵 梯度混合器 预柱 手动-进样器 自动-进样器 保护柱 色谱柱 柱后反应器 柱温箱 检测器 馏分收集器 积分仪 工作站 计算机 接口 温度控制单元 样品制备单元 液相色谱仪器结构组成示意图 液相色谱的应用 色谱的基本原理 色谱法的分离原理是：溶于流动相(mobile phase)中的各组分经过固定相时，由于与固定相(stationary phase)发生作用（吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和）的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出。又称为色层法、层析法。 HPLC的特点和优点 高压——压力可达150~300 Kg/cm2。色谱柱每米降压为75 Kg/cm2以上。 高速——流速为0.1~10.0 ml/min。 高效——可达5000塔板每米。在一根柱中同时分离成份可达100种。 高灵敏度——紫外检测器灵敏度可达0.01ng。同时消耗样品少。 HPLC与经典液相色谱相比有以下优点： 速度快——通常分析一个样品在15~30 min，有些样品甚至在5 min内即可完成。 分辨率高——可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果。 灵敏度高——紫外检测器可达0.01ng，荧光和电化学检测器可达0.1pg。 柱子可反复使用——用一根色谱柱可分离不同的化合物。 样品量少，容易回收——样品经过色谱柱后不被破坏，可以收集单一组分或做制备。 色谱基本理论 色谱的主要理论 热力学理论 以相的平衡观点研究色谱过程 塔板理论为代表 (Martin Synge) 动力学理论 以动力学观点研究各种动力学因素对色谱峰的影响 Van Deemter 方程为代表 Martin Synge * * * Examples: Anti-inflammatories from pharmaceutical preparations (M1008) Fungicides from citrus fruit (M2) Lipid classes from serum (M289) This mechanism can be more selective than non-polar extraction because not every organic molecule can show polar interactions and of those that do, there is more than one type of polar interaction available to differentiate between these molecules. It is possible, for instance, to separate two molecules that differ by only one functional groups such as a hydroxyl, and to do this in a reproducible fashion. This is harder to achieve using non-polar sorbents. 高效液相色谱仪基础 培训课程 液相色谱基础 色谱方法发展 色谱的基本理论 色谱固定相和流动相 色谱系统 定性定量分析方法 简易故障排除 色谱方法的发展过程 Chromatography 色 谱 M.S. Tswett 色谱的创始人—俄国植物学家 组分为何要进行分离 定量 定性 联用技术 样品纯化 成份分析 分离 色谱方法分类 不同的流动相和固定相构成不同分离方式 气相色谱 液相色谱 HPLC 与 GC 的应用差异 液相色谱的分类 反相色谱是目前使用最普遍的一种色谱方法 吸附法 固定相为固体 硅胶silica 和 alumina（氧化铝） 是最常用的固定相 通过一系列的吸附/脱附步骤形成分离 溶质与溶剂均吸附在固定相极性端 样品分子对固定相的吸附程度不同而形成分离 流动相 固定相 分配法 溶质在液固两相间的相对溶解度不同而达到分离 与固定相亲和力强的物质其保留时间也较长 两种基本操作模式 正相分离：极性固定相、非极性流动相 反相分离：非极性固定相、极性流动相 固定相 流动相 分配法 正相与反相分离 正相色谱 反相色谱 非极性流动相 极性流动相 非极性相互作用 范德华力 Van der Waals forces NH2 SO3- 硅胶基体 键和官能团 (C8) Dipolar attraction or hydrog