病理切片的特殊染色方法.docVIP

病理切片的特殊染色方法 病理切片的特殊染色方法 病理切片的特殊染色方法 一、常用胶原纤维染色方法 　　1.Van Gieson苦味酸和酸性品红法 　　【染色方法】 　　（1）中性甲醛固定组织，石蜡切片； 　　（2）组织切片脱蜡至水； 　　（3）用Van Gieson液染1～5分钟； 　　（4）倾去染液，直接用95％乙醇分化和脱水； 　　（5）无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。 　　【结果】胶原纤维呈红色，肌纤维、胞质及红细胞呈黄色。 　　2.Masson氏结缔组织三合染色法 　　【染色方法】 　　（1）石蜡切片厚6μm，脱蜡至水； 　　（2）0.2％冰醋酸水溶液浸泡片刻； 　　（3）Masson氏染色液中5分钟或更长时间； 　　（4）0.2％冰醋酸水溶液浸泡片刻； 　　（5）5％磷钨酸水溶液2～3分钟，再入0.2％冰醋酸水溶液浸洗 　　（6）投入淡绿、冰醋酸水溶液浸染5分钟或更长时间； 　　（7）再入0.2％冰醋酸水溶液浸洗片刻； 　　（8）脱水、透明和封固。 　　【结果】胞浆和神经胶质纤维染红色，胶原纤维染绿色。 二、常用网状纤维染色方法 　　【染色方法】 　　（1）石蜡切片、脱蜡至水； 　　（2）0.25％高锰酸钾液3分钟； 　　（3）蒸馏水洗2次； 　　（4）1％草酸漂白即可； 　　（5）蒸馏水洗2次； 　　（6）2.5％铁明矾水溶液媒染5～10分钟，蒸馏水洗多次； 　　（7）二氨氢氧化银浸染1分钟，蒸馏水洗3次； 　　（8）10％甲醛液还原2分钟，蒸馏水洗3次； 　　（9）0.2％氯化金液调色1～2分钟，蒸馏水洗3次； 　　（10）5％硫代硫酸钠固定5分钟； 　　（11）蒸馏水洗，需要时复染； 　　（12）水洗、脱水、透明和封固。 　　【结果】网状维呈黑色，其他组织呈复染的颜色。 三、常用弹力纤维染色方法 　　显示弹性、胶原纤维的双重组合染色法 　　【染色方法】 　　（1）中性甲醛液固定组织，石蜡切片，常规脱蜡至水； 　　（2）切片入70％乙醇中洗2分钟； 　　（3）将切片浸入盛有维多利亚蓝液中染0.5～2小时； 　　（4）直接入95％乙醇中分色数秒钟； 　　（5）浸入蒸馏水洗2分钟； 　　（6）用丽春红S液滴染切片5分钟； 　　（7）直接用无水乙醇冲洗多余染色液2次； 　　（8）将切片在空气中或冷风干燥； 　　（9）二甲苯透明，中性树胶封固。 　　【结果】弹性纤维呈蓝绿色，胶原纤维呈红色，背景呈淡黄色。 四、脂肪染色 　　【染色方法】 　　（1）冰冻切片厚度8～15μm； 　　（2）Harris苏木素，染约1分钟； 　　（3）自来水洗后，用0.5％盐酸乙醇分化，再水洗直至胞核返蓝为止； 　　（4）蒸馏水洗后移入70％乙醇内浸洗一下； 　　（5）浸入苏丹III染液中约30分钟或更长时间（如果置于56℃温箱中可适当缩短时间）； 　　（6）在70％乙醇分化数秒钟； 　　（7）待切片在空气中稍凉干或用冷风机吹干； 　　（8）及时用明胶甘油封片。 　　【结果】脂肪呈橘红色，脂肪酸不着色，胞核淡蓝色。 五、糖原染色 　　高碘酸－Schiff（Periodic acid Schiff，PAS）染色法 　　【染色方法】 　　（1）切片脱蜡至蒸馏水； 　　（2）浸入高碘酸氧化液中10～20分钟； 　　（3）蒸馏水洗2次； 　　（4）Schiff液染色10～30分钟； 　　（5）流水冲洗5分钟； 　　（6）用苏木素染细胞核3～5分钟； 　　（7）在盐酸酒精中分化，自来水洗至细胞核变蓝为止； 　　（8）脱水、透明和封固。 　　【结果】糖原和粘蛋白呈紫红色，细胞核染蓝色，霉菌也呈紫红色等。 六、粘液物质（粘多糖）染色法 　　【染色方法】 　　（1）切片入二甲苯，后递次向下直到入水； 　　（2）3％冰醋酸溶液3分钟； 　　（3）在奥辛兰溶液中染5分钟； 　　（4）入3％冰醋酸3分钟，蒸馏水洗（3次）； 　　（5）用1％过碘酸处理10分钟，蒸馏水洗； 　　（6）入Schiff液10～30分钟； 　　（7）流动自来水洗10分钟； 　　（8）逐级酒精脱水，二甲苯透明； 　　（9）中性树胶封固。 　　【结果】酸性粘多糖染兰色；中性粘蛋白染品红色；中性和酸性粘蛋白混合物染紫色。 七、横纹肌染色 　　Mallory磷钨酸－苏木素染色法PTAH 　　【染色方法】 　　（1）切片脱蜡至水； 　　（2）在酸性高锰酸钾液中氧化5～10分钟； 　　（3）自来水充分洗，蒸馏水洗2次； 　　（4）用1％草酸液漂白2分钟； 　　（5）自来水洗，蒸馏水洗2次； 　　（6）浸入MalloryPTAH液中12～48小时； 　　（7）直接用95％乙醇分化； 　　（8）无水乙醇急速脱水，二甲苯透明和树胶封固。 　　【结果】胞核、纤维、肌肉、神经胶质纤维、纤维素、横纹肌等均呈