抗原抗体及其结合反应.pptxVIP

第二章 抗原和抗体及其结合反应 医学技术学院免疫教研室 教 学 目 的 掌握：抗原抗体结合力、抗原抗体结合反应特点 熟悉：影响抗原抗体结合反应的因素 第一节 抗原 一、抗原的特性 免疫原性、免疫反应性 特异性 二、用于免疫测定的抗原分类 天然、合成多肽、基因重组 第二节 抗体 一、抗体的特性 特异性、多样性、免疫原性 二、用于免疫测定的抗体分类 多克隆、单克隆、基因工程 三、抗体产生的规律 初次应答、再次应答 第三节 抗原抗体结合反应的原理 抗原抗体反应:指抗原与相应抗体之间所发生的特异性结合反应。 抗原表位与抗体高变区间的结构互补 抗原表位与抗体高变区的紧密接触 抗原抗体之间的结合力 亲水胶体转化为疏水胶体 物质基础 一、抗原抗体结合力 静电引力 范德华引力 氢键 疏水作用力 抗原抗体结合力示意图 １.静电引力（electrostatic forces） 抗原和抗体分子带有相反电荷的氨基和羧基基团之间相互吸引的力。 又称为库伦引力 2.范德华引力（Vonder Waals forces） 抗原和抗体相互接近时，由于分子的极化作用而出现的引力。 范德华引力静电引力 3.氢键结合力 供氢体上的氢原子与受氢体原子间的引力 供氢体：羧基、氨基和羟基 受氢体：羧基氧、羧基碳和肽键 氢键具有高度的方向性 4.疏水作用力（疏水键） 两个疏水基团在水溶液中相接触时，由于对水分子排斥而趋向聚集力。 二、抗原抗体的亲和力和亲合力 抗原抗体亲和力示意图 抗原抗体亲合力示意图 三、液相中抗原抗体的结合反应 抗原抗体复合物 (疏水胶体) 可见反应 电解质 抗原 (亲水胶体) 抗体 ﹢ 四、固相表面抗原抗体的结合反应 1. 抗原抗体结合反应时间 2. 反应体积 3. 解离速度 4. 固相化抗原或抗体的构象 第四节 抗原抗体结合反应的特点 特异性 可逆性 比例性 阶段性 亲水胶体转化为疏水胶体示意图 亲水胶体 疏水胶体 可见反应 一、特异性 抗原抗体反应特异性示意图 特异性示意图 交叉反应（cross reactions） 抗原抗体交叉反应示意图 二、可逆性 可逆性：抗原与相应抗体结合成复合物后，在一定条件下又可解离为游离抗原与抗体的特性 影响因素： 抗体对相应抗原的亲合力 环境因素对复合物的影响 　　【Ag】+【Ab】 【Ag-Ab】  解离后抗原抗体仍保持原有特性。 一定条件：低pH、高浓度盐等。 Ab1 比例性：抗原与抗体发生可见反应需遵循一定的量比关系 最适比： 沉淀物最多时的抗原抗体的浓度比或量比 等价带: 抗原与抗体分子比例合适范围 前 带： 抗体过量 后 带： 抗原过量 三、比例性 抗原抗体反应比例性示意图 四、阶 段 性 第一阶段：特异性结合阶段 第二阶段：反应可见阶段 第五节 影响抗原抗体结合反应的因素 抗原抗体本身因素 反应基质因素 实验环境因素 一、抗原抗体本身因素 抗原:理化性状、表位种类和数目 抗体:来源、特异性、亲和性、效价 来源 R型Ab：等价带宽， 易出现可见反应。 H型Ab：等价带窄，易出现前带或后带 McAb: 不宜用于凝集和沉淀反应。 浓度：是相对Ag而言，比例要合适，故实验前需滴定，以求最适Ag与Ab比例。 特异性与亲和力：关键因素，选择特异性与亲 和力高的Ab。 二、反应基质因素 非特异性因素，如蛋白、盐、 药物等 三、实验环境因素 电解质: 0.85%生理盐水或缓冲液 酸碱度: pH 6~8 温 度: 37℃最适 (一）电解质 作用：中和胶体表面电荷，破坏水化层，使Ag-Ab聚集。 常用：0.85%NaCl溶液，缓冲液、Ca2+、Mg2+等。 （二）酸碱度 抗原抗体反应中一般以pH6-8为宜，有补体参与的反应最适pH为7.2-7.4 酸凝集：当pH为3左右时，接近细菌Ag的等电点，可出现非特异性凝集。 （三）温度 最适温度为37℃或室温18-25℃为宜。若温度高于56℃，可导致已结合了的抗原抗体复合物解离，甚至分子变性。 抗原抗体反应类型 反应类型 实验技术 结果判断 凝集反应 直接凝集试验 观察凝集现象 间接凝集试验 同上 抗球蛋白试验 同上 沉淀反应 液相沉淀试验 观察沉淀，检测浊度 免疫电泳技术 观察扫描沉淀峰、沉淀弧 补体参与的反应 补体溶血试验 观察测定溶血现象 补体结合试验 同上 反应类型 实验技术 结果判断 中和反应 病毒中和试验 检测病毒感染性 毒素中和试验 检测外毒素毒性 标记免疫反应 荧光免疫技术 检测荧光现象 放射免疫技术 检测放射性强度 酶免疫技术 检测酶底物显