实验一显微镜的使用.pptVIP

要求和注意事项： 遵守实验室各种规则 按要求使用对应的实验台和显微镜，不可随意调换。 珍惜学习时间，认真完成实验和实验报告。 维护好实验室清洁和秩序，物品回归原位。 实验报告格式： 一、实验目的 二、实验原理 三、实验材料和方法 四、实验结果 五、讨论（至少2次！切忌没有主体、缺乏逻辑性、句子不完整。 ） 六、作业 本学期实验内容： 实验一 光学显微镜： 70 普通显微镜、相差显微镜 荧光显微镜、倒置显微镜 实验二 细胞化学 DNA的细胞化学Feulgen、 RNA的细胞化学Brachet 、 多糖的显示PAS 实验三 细胞骨架的光学显微镜观察 实验四 细胞培养及观察（连续3-4天） 细胞复苏、细胞换液、 细胞冻存 实验五 动物细胞染色体制备及观察 实验一 显微镜的使用 相差显微镜 荧光显微镜 一、相差显微镜 实验目的 实验原理： 1 相关光学概念 波长、振幅、衍射、相位、相位差、相消干涉、相长干涉 2 相差显微镜的主要部件 3 相差显微镜的构造原理 实验内容： 1 调试相差显微镜 2 制作临时装片观察 草履虫、细菌、紫鸭跖草花丝表皮毛 3 观察示范镜完成实验指导作业 振幅差标本：波长决定颜色，振幅决定明暗，人眼只能在光波的波长和振幅有差异时才能识别被检物体，经固定染色而具有上述两种差异的标本称振幅差标本。 相位差标本：比较透明的标本（比如活标本）时，光的波长和振幅没有明显差异，但是其各部分却有厚度和折射率的不同，光线通过这种标本时，直射光和衍射光的相位就会有差别。随着光程的增加或减少，加快或落后的光波的相位会发生改变（产生相位差） ，这类标本称相位差标本。相差显微镜才能看。 相差显微镜如何将光的相位差转变为人眼可以察觉的振幅差（明暗差），从而使原来透明的物体表现出明显的明暗差异，对比度增强？ ※相差聚光器：由聚光器和环形光阑组成，后者由大小不同的环状通光孔构成。 ※相差物镜：在其后焦面上装有种类不同的相板，分为并协区和共轭区。 ※合轴调节望远镜CT：调节环形光阑的环孔（亮环）与相板共轭区环孔（暗环）完全吻合。 ※绿色滤光镜：允许500-600nm的绿光通过，吸收红光、蓝紫光，，提高相差物镜的分辨能力。。 根据相长干涉原理，合成光等于直射光与衍射光振幅之和，因背景只有直射光的照明，所以通过被检物体的合成光就比背景明亮。这样的效果叫明反差（负反差），镜检效果是暗中之明。 根据相消干涉原理，这样通过被检物体的合成光要比背景暗，这种效果叫暗反差（正反差），即镜检效果是明中之暗。 相差显微镜调试 合轴调节 环状光阑的像（亮环）必须与相板共轭面（暗环）完全吻合，才能实现对直射光和衍射光的各行其道。否则应被吸收的直射光被泄掉，而不该吸收的衍射光反被吸收，应推迟的相位有的不能被推迟，这样就不能达到相差镜检的效果。（环形光阑与相差目镜必须匹配） 通过合轴调节，使明亮的环状光阑圆环与暗的相板上共轭面暗环完全重叠。 自作草履虫标本观察 示范镜草履虫、大肠杆菌、紫鸭跖草花丝表皮毛细胞观察，并填表P4-3 二、荧光显微镜 实验目的 实验原理 1、荧光现象 2、荧光显微镜的主要部件和工作原理 3、直接荧光和间接荧光 实验内容 秋葵花粉粒、百合花粉粒、水绵叶绿体观察 固定装片观察 作业思考题 荧光现象：物质分子吸收较短波长的光能后由基态跃迁为激发态，当这类分子再回到基态时，把多余的能量以波长较长的光发射出来。 自发荧光（直接荧光）诱发荧光（间接荧光） 自发荧光：生物标本受到紫外光照射后直接发出的荧光。 诱发荧光：生物材料受到紫外光照射后不发出荧光，吸附荧光染料后而产生的荧光。 特点：光源为紫外线，波长较短，分辨力高于普通显微镜。 有两个特殊的滤光片； 照明方式通常为落射式。 操作前  仔细阅读操作说明!! * * 西南大学生命科学学院 课程成绩： 70+20+10 自主综合实验：20+10 实验项目： 外周血淋巴细胞培养与染色体标本制备、染色体组型分析 程 序： 选题、准备方案、 清点实验用品、实施方案 总 结 每班分4组，组长负责制 教学目的、教师和学生的任务 主要部件： 直射光透过共轭区，衍射光透过并协区。 加了涂有氟化镁的相位板，可将直射光或衍射光的相位推迟1/4λ 衍射 衍射光比直射光相位延迟1/4λ 后焦面 并协区涂上氟化镁，衍射光相位再延迟1/4λ，发生相消干涉。 若共轭区涂上氟化镁，直射光相位延迟1/4λ，发生相长干涉 40× PL